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目的: 通过建立慢性低氧高二氧化碳大鼠模型,分别观察慢性低氧高二氧化碳、低频电刺激、高频电刺激对该大鼠模型骨骼肌肌纤维类型的影响以及探讨microRNA/Sox6通路可能发挥的作用。 方法: 将50只成年雄性SD大鼠用随机数字表法分成空白对照组(NC组)、低氧高二氧化碳组(HH组)、低氧高二氧化碳+捆绑组(HB组)、低氧高二氧化碳+低频电刺激组(LFES组)、低氧高二氧化碳+高频电刺激组(HFES组),每组各10只。建立慢性低氧高二氧化碳大鼠模型:除NC组外其余四组均置于低氧高二氧化碳舱中(维持舱内O2浓度为9%~11%,CO2浓度为5%~6%),每天8小时,每周7天,持续4周;其余时间同对照组饲养于正常环境中。苏木精伊红染色法观察各组骨骼肌截面积及病理改变,免疫组化法观察各组骨骼肌肌纤维类型组成,免疫荧光双标法检测各组腓肠肌Sox6及慢肌纤维表达,实时荧光定量PCR法检测骨骼肌microRNA-208b,microRNA-499,MHC-Ⅰ,MHC-Ⅱa,MHC-Ⅱx mRNA表达,Westernblot法检测MHC-Ⅰ,Sox6,ERRγ,PPARβ蛋白的表达。 结果: (1)HE结果显示,高频电刺激后HFES组大鼠比目鱼肌炎症细胞数目相比HH组增加,此外可见HFES组大鼠局部肌纤维出现肌细胞核内移。 (2)免疫组化结果显示,LFES组大鼠比目鱼肌Ⅰ型肌纤维截面积相比HH组或者HB组有明显升高,差异有统计学意义(p<0.05); HH组、HB组大鼠比目鱼肌Ⅱ型肌纤维截面积相比NC组明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); LFES组大鼠比目鱼肌Ⅱ型肌纤维截面积相比HH组或者HB组明显升高,差异有统计学意义(p<0.05); HFES组大鼠比目鱼肌Ⅱ型肌纤维截面积相比HH组或者HB组截面积有明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。 (3)Western blot显示HH组以及HB组大鼠比目鱼肌MHC-Ⅰ蛋白含量相比NC组明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); LFES组大鼠比目鱼肌MHC-Ⅰ蛋白含量相比HB组或者HH组含量明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。 (4)实时荧光定量PCR结果显示,HH组以及HB组大鼠比目鱼肌MHC-Ⅰ mRNA含量相比NC组明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); HH组以及HB组大鼠比目鱼肌MHC-Ⅱa、MHC-Ⅱx mRNA含量相比NC组明显升高,差异有统计学意义(p<0.05); LFES组大鼠比目鱼肌MHC-Ⅰ mRNA含量相比HH组或者HB组明显升高,差异有统计学意义(p<0.05);LFES组大鼠比目鱼肌MHC-Ⅱa,MHC-Ⅱx mRNA含量相比HH组或者HB组含量明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); HFES组大鼠比目鱼肌MHC-Ⅰ mRNA含量相比HH组或者HB组明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); HFES组大鼠比目鱼肌MHC-Ⅱa,MHC-ⅡxmRNA含量相比HH组或者HB组含量明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。 (5)Western blot显示HH组以及HB组大鼠比目鱼肌Sox6含量相比NC组明显升高,差异有统计学意义(p<0.05); LFES组大鼠比目鱼肌Sox6含量相比HB组或者HH组明显下降,差异有统计学意义(p<0.05)。 (6)实时荧光定量PCR结果显示,HH组以及HB组大鼠比目鱼肌mir-499,mir-208含量相比NC组明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); LFES组大鼠比目鱼肌mir-499,mir-208b含量相比HH组或者HB组含量明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。 (7)Western blot显示,HB组以及HH组大鼠比目鱼肌PPARβ含量相比NC组明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); LFES组大鼠比目鱼肌PPARβ含量相比HB组或者HH组含量明显升高,差异有统计学意义(p<0.05); HFES组大鼠比目鱼肌PPARβ含量相比HH组或者HB组含量明显下降,差异有统计学意义(p<0.05)。 (8)Western blot显示,LFES组大鼠比目鱼肌ERRγ含量相比HH组或者HB组含量明显增加,差异有统计学意义(p<0.05); HFES组大鼠比目鱼肌ERRγ含量相比HH组或者HB组含量明显下降,差异有统计学意义(p<0.05)。 (9)HE结果显示,HH组以及HB大鼠腓肠肌炎症细胞数目较NC组明显增加。 (10)免疫组化结果显示,HH组以及HB组大鼠腓肠肌MHC-Ⅱ纤维平均截面积相比NC组明显减少,差异有统计学意义(p<0.05); HFES组大鼠腓肠肌MHC-Ⅱ纤维平均截面相比HH组或者HB组明显增加,差异有统计学意义(p<0.05)。 (11) Western blot结果显示,HH组以及HB组大鼠腓肠肌MHC-Ⅰ蛋白含量相比NC组明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); LFES组大鼠腓肠肌MHC-Ⅰ蛋白含量相比HH组或者HB组含量明显升高,差异有统计学意义(p<0.05); HFES组大鼠腓肠肌MHC-Ⅰ蛋白含量相比HH组或者HB组含量明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。 (12) Western blot结果显示,HH组以及HB组大鼠腓肠肌Sox6蛋白含量相比NC组明显增加,差异有统计学意义(p<0.05); LFES组以及HFES组大鼠腓肠肌Sox6蛋白含量相比HH组或者HB组含量明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); (13)实时荧光定量PCR结果显示,HH组以及HB组大鼠腓肠肌mir-499,mir-208b含量相比NC组明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); LFES组以及HFES组大鼠腓肠肌mir-499,mir-208b含量相比HH组或者HB组含量明显增加,差异有统计学意义(p<0.05)。 (14) Western blot结果显示,HH组以及HB组大鼠腓肠肌PPARβ,ERRγ含量相比NC组明显下降,差异有统计学意义(p<0.05); LFES组以及HFES组大鼠腓肠肌PPARβ,ERRγ含量相比HH组或者HB组含量明显增加,差异有统计学意义(p<0.05)。 结论: (1)慢性低氧高二氧化碳可引起大鼠腓肠肌、比目鱼肌损伤; (2)慢性低氧高二氧化碳可引起大鼠腓肠肌、比目鱼肌慢肌纤维含量下降; (3)低频电刺激可增加慢性低氧高二氧化碳大鼠腓肠肌、比目鱼肌慢肌纤维数量; (4)高频电刺激可增加慢性低氧高二氧化碳大鼠腓肠肌慢肌纤维数量; (5)慢性低氧高二氧化碳、低频电刺激、高频电刺激通过PPARβ/ERRγ/microRNA/Sox6通路调节大鼠腓肠肌Ⅰ型纤维含量; (6)慢性低氧高二氧化碳、低频电刺激、高频电刺激通过PPARβ/microRNA/Sox6通路调节大鼠比目鱼肌Ⅰ型纤维含量。