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溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)是一种病因尚不明确的非特异性炎症性疾病，病程呈慢性且容易复发，迁延不愈。目前治疗方法单一且效果欠佳。随着我国该病的发病率逐渐升高的趋势，探索新型的治疗方法势在必行。国外早先初次报道造血干细胞治疗非霍奇金淋巴瘤合并溃疡性结肠炎后，患者UC的症状得到良好缓解。而近年来发现，骨髓间充质干细胞因其极低的免疫原性和极强的免疫调节抑制能力成为治疗更有力的候选者。但多方研究仍未就MSC发挥作用的靶点及途径等诸多问题达成一致。本实验旨在讨论PD-1通路在MSC对免疫系统特别是淋巴细胞数量方面的影响以佐证MSC发挥作用所通过的细胞接触途径。
材料与方法
建立DSS诱导的实验性结肠炎模型，进行DAI临床评分。用贴壁法培养获得雄性SD大鼠的MSCs，连续传代纯化，并进行流式鉴定。从溃疡性结肠炎模型大鼠的脾脏取出分离淋巴细胞，并用CFSE对其进行标记，将标记后的淋巴细胞分为AB两组。MSC经致死量辐照后分为AB两组，A组加入PD-1及PDL-1抗大鼠抗体，B组加入等量的IgG同型抗体。将A组MSC与A组淋巴细胞按1∶3的比例共同培养，B组MSC与B组淋巴细胞按1∶3的比例共同培养。72小时后流式细胞仪计数AB两组细胞560nm激发光下的数量。
结果：
1.模型大鼠表现出实验性结肠炎的症状及表现，造模成功。
2.MSC与脾淋巴细胞共同培养后，A组与B组脾淋巴细胞数量的差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：
1.PD-1通路的阻断可以部分削弱MSC对脾淋巴细胞的抑制作用，恢复了部分淋巴细胞的活性。
2.PD-1通路作用的发挥需要细胞接触。