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本文主要从以下几个部分展开论述：
第一部分 肺腺癌转移相关lncRNAs标志物的筛选及预后评估模型的构建
目的:
本研究旨在通过分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库，筛选与肺腺癌转移和无复发生存时间(RFS)密切相关的lncRNAs分子标志物，继而构建患者复发预后评估模型，同时结合体外实验，初步验证模型分子在肿瘤细胞侵袭迁移中的作用。
方法:
1.肺腺癌转移相关lncRNAs分子标志物的初步筛选。
2.肺腺癌预后lncRNA panel的构建。
3.lncRNA panel的验证。
4.检测lncRNA panel预测预后的独立性。
5.比较lncRNA panel、TNM分期及联合模型对肺腺癌患者的预后预测能力。
6.研究lncRNA panel分子在肺腺癌转移中的作用。
结果:
1.LncRNAs差异表达分析结果显示，肺腺癌患者转移组和非转移组间差异表达的lncRNAs为735个，可作为用于肺腺癌患者预后评估的候选标志物。
2.在训练集中，将候选lncRNAs分子全部纳入单因素Cox比例风险回归模型，获得43个P值小于0.05的lncRNAs，进一步进行多因素Cox比例风险回归模型逐步分析，建立包含6个lncRNAs分子的肺腺癌预后lncRNA panel公式:Riskscore=(0.191404×LINC02323)+(0.256783×ZNF649.AS1)+(0.502202×HNF4A.AS1)+(-0.319007×LINC01819)+(-0.306173×FAM222A.AS1)+(-0.304856×LINC00672)。取Riskscore的平均值为lncRNA panel预测预后的最佳临界值，根据该临界值分为高风险组(n=119)和低风险组(n=112)。Kaplan-Meier生存分析显示，高风险组患者的RFS显著低于低风险组患者(log-rank test，P＜0.001);时间依赖性ROC曲线分析结果显示lncRNA panel预测患者复发的3年ROC曲线下面积(area under ROC curve, AUC)为0.6970(95％ CI:0.6102-0.7821),5年AUC为0.6981(95％ CI:0.5866-0.8089)。
3.在验证集中，Kaplan-Meier生存分析结果显示，高风险组的RFS显著低于低风险组(log-rank test，P＜0.001);分别以3年和5年为截点进行时间依赖性ROC曲线分析结果显示，lncRNA panel预测复发的3年AUC为0.7620(95％ CI:0.5884-0.9459)，5年AUC为0.8421(95％ CI.0.6534-0.9957)。总样本集中所得结果与验证集一致:Kaplan-Meier生存分析显示高风险组患者的RFS显著低于低风险组患者（log-rank test，P＜0.001）;分别以3年和5年为截点进行时间依赖性ROC曲线分析，结果显示lncRNA panel预测复发的3年AUC为0.7059(95％CI:0.6322-0.7801),5年AUC为0.7307(95％ CI:0.6368-0.8217)。
4.在总样本集中，单因素和多因素Cox比例风险回归模型显示，TNM分期和lncRNA panel为肺腺癌患者的独立预后因素。Kaplan-Meier分层生存分析结果显示，lncRNA panel在早期组（TNM I期+II期）、原发肿瘤状态(T1+T2)组和区域淋巴结状态(N)组的高风险组患者的RFS显著低于低风险患者(log-ranktest，P＜0.05)。
5.lncRNA panel与TNM分期对肺腺癌患者预后预测能力的比较:以3年为截点时，总样本集lncRNA panel的AUC为0.7059(95％CI:0.6322-0.7801)，TNM分期的AUC为0.6678(95％CI:0.5769-0.7613)，lncRNA panel对肺腺癌预后的预测能力显著优于TNM分期(P＜0.05);以5年为截点时，总样本集lncRNA panel的AUC为0.7307(95％CI:0.6368-0.8217)，TNM分期的AUC为0.6111(95％CI:0.5044-0.7229)，lncRNA panel对肺腺癌预后的预测能力显著优于TNM分期（P＜0.05）。
将lncRNA panel与TNM分期系统相结合构建预测肺腺癌复发的联合模型，以3年为截点时，联合模型在总样本集中的AUC为0.7474(95％CI:0.6745-0.8198);以5年为时间截点时，AUC为0.7670(95％CI:0.6723-0.8564)。联合模型与TNM分期比较，预测能力显著优于TNM分期（P均＜0.05），联合模型与单独lncRNApanel的预测能力比较，无显著性差异（P均＞0.05）。
6.Transwell迁移和侵袭实验结果显示，lncRNA panel中的6个分子对肺腺癌细胞的迁移及侵袭能力均有影响，以LINC02323促进肺腺癌细胞迁移和侵袭的作用最为明显。
结论:
1.本研究通过分析TCGA数据库，首次系统筛选了与肺腺癌转移密切相关的lncRNAs标志物，进一步结合分子预后分析，构建了由6个lncRNAs分子构成的lncRNA panel，后者作为肺腺癌复发预测模型，是独立预后因素，其预测效能显著优于传统的TNM分期系统，具有重要临床应用价值。
2.该lncRNA panel中的6个分子与肿瘤转移及患者预后密切相关，提示其可作为转移癌的潜在治疗靶点。
第二部分 LINC02323参与肺腺癌转移的相关分子机制研究
目的:
基于第一部分肺腺癌转移相关lncRNAs标志物的筛选及其预后模型构建的研究，我们进一步对模型分子进行功能解析，重点探讨LINC02323在转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）调控的肺腺癌细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)中的分子生物学作用机制。
方法:
1.分析LINC02323表达的临床价值。
2.观察LINC02323表达对肺腺癌细胞生物学行为的影响。
3.研究LINC02323在TGF-β调控的肺腺癌细胞EMT中的分子生物学作用机制。
结果:
1.StarBase v2.0软件分析结果显示，LINC02323在肺腺癌、肺鳞状细胞癌、膀胱移行细胞癌、胰腺癌、肝细胞癌、肾乳头状细胞癌、结肠癌和胆管癌等多种肿瘤组织中的表达水平显著高于正常组织（P均＜0.05）;Kaplan-Meier生存分析显示，LINC02323高表达与肺腺癌患者的不良预后相关，高风险组患者和低风险组患者的RFS存在显著差异（log-rank test，P＜0.001）。
2.核质分离实验结果显示，LINC02323在细胞质和细胞核中都有分布，分布比例分别是44.49％和55.51％; MTT实验结果显示，与对照组相比，LINC02323干扰和过表达后，肺腺癌细胞增殖活力没有显著变化（P均＞0.05）;Transwell小室实验结果显示，与对照组相比，干扰和过表达LINC02323后，肺腺癌细胞的迁移及侵袭能力有显著变化（P均＜0.05）。
3.RT-qPCR和Western blot结果显示，TGF-β可以诱导肺腺癌细胞发生EMT过程，同时上调LINC02323的表达;LINC02323在肺腺癌细胞中干扰或过表达后，显著影响了TGF-β诱导的EMT过程;生信预测结果表明，LINC02323与miR-1343-3p之间存在靶向结合位点，miR-1343-3p可直接结合转化生长因子β受体Ⅰ（transforming growth factor-β receptor1，TGFBR1）基因3-UTR; TCGA转录组表达谱数据分析结果显示，LINC02323与miR-1343-3p在肺腺癌组织中的表达呈负相关(P＜0.05);双荧光素酶报告系统和RT-qPCR实验验证了LINC02323可以与miR-1343-3p靶向结合，miR-1343-3p可以和TGFBR1基因3-UTR靶向结合;通过拯救实验，发现抑制miR-1343-3p可以拯救下调LINC02323对肺腺癌细胞EMT、迁移和侵袭的影响，即LINC02323可以作为ceRNA，通过“海绵样作用”竞争结合miR-1343-3p，间接调节TGFBR1的表达，促进肺腺癌细胞EMT的发生及其转移能力的提高。
结论:
1.本研究首次发现，LINC02323在包括肺腺癌在内的多种肿瘤组织中高表达，与肺腺癌不良预后密切相关，提示其可能发挥重要的促癌功能。
2.LINC02323通过调节肺腺癌细胞中的miR-1343-3p-TGFBR1轴参与TGF-β调控的肿瘤细胞EMT过程，说明该分子是肺腺癌侵袭转移过程中的关键分子，可作为抗肿瘤转移治疗的潜在靶点。
第一部分 肺腺癌转移相关lncRNAs标志物的筛选及预后评估模型的构建
目的:
本研究旨在通过分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库，筛选与肺腺癌转移和无复发生存时间(RFS)密切相关的lncRNAs分子标志物，继而构建患者复发预后评估模型，同时结合体外实验，初步验证模型分子在肿瘤细胞侵袭迁移中的作用。
方法:
1.肺腺癌转移相关lncRNAs分子标志物的初步筛选。
2.肺腺癌预后lncRNA panel的构建。
3.lncRNA panel的验证。
4.检测lncRNA panel预测预后的独立性。
5.比较lncRNA panel、TNM分期及联合模型对肺腺癌患者的预后预测能力。
6.研究lncRNA panel分子在肺腺癌转移中的作用。
结果:
1.LncRNAs差异表达分析结果显示，肺腺癌患者转移组和非转移组间差异表达的lncRNAs为735个，可作为用于肺腺癌患者预后评估的候选标志物。
2.在训练集中，将候选lncRNAs分子全部纳入单因素Cox比例风险回归模型，获得43个P值小于0.05的lncRNAs，进一步进行多因素Cox比例风险回归模型逐步分析，建立包含6个lncRNAs分子的肺腺癌预后lncRNA panel公式:Riskscore=(0.191404×LINC02323)+(0.256783×ZNF649.AS1)+(0.502202×HNF4A.AS1)+(-0.319007×LINC01819)+(-0.306173×FAM222A.AS1)+(-0.304856×LINC00672)。取Riskscore的平均值为lncRNA panel预测预后的最佳临界值，根据该临界值分为高风险组(n=119)和低风险组(n=112)。Kaplan-Meier生存分析显示，高风险组患者的RFS显著低于低风险组患者(log-rank test，P＜0.001);时间依赖性ROC曲线分析结果显示lncRNA panel预测患者复发的3年ROC曲线下面积(area under ROC curve, AUC)为0.6970(95％ CI:0.6102-0.7821),5年AUC为0.6981(95％ CI:0.5866-0.8089)。
3.在验证集中，Kaplan-Meier生存分析结果显示，高风险组的RFS显著低于低风险组(log-rank test，P＜0.001);分别以3年和5年为截点进行时间依赖性ROC曲线分析结果显示，lncRNA panel预测复发的3年AUC为0.7620(95％ CI:0.5884-0.9459)，5年AUC为0.8421(95％ CI.0.6534-0.9957)。总样本集中所得结果与验证集一致:Kaplan-Meier生存分析显示高风险组患者的RFS显著低于低风险组患者（log-rank test，P＜0.001）;分别以3年和5年为截点进行时间依赖性ROC曲线分析，结果显示lncRNA panel预测复发的3年AUC为0.7059(95％CI:0.6322-0.7801),5年AUC为0.7307(95％ CI:0.6368-0.8217)。
4.在总样本集中，单因素和多因素Cox比例风险回归模型显示，TNM分期和lncRNA panel为肺腺癌患者的独立预后因素。Kaplan-Meier分层生存分析结果显示，lncRNA panel在早期组（TNM I期+II期）、原发肿瘤状态(T1+T2)组和区域淋巴结状态(N)组的高风险组患者的RFS显著低于低风险患者(log-ranktest，P＜0.05)。
5.lncRNA panel与TNM分期对肺腺癌患者预后预测能力的比较:以3年为截点时，总样本集lncRNA panel的AUC为0.7059(95％CI:0.6322-0.7801)，TNM分期的AUC为0.6678(95％CI:0.5769-0.7613)，lncRNA panel对肺腺癌预后的预测能力显著优于TNM分期(P＜0.05);以5年为截点时，总样本集lncRNA panel的AUC为0.7307(95％CI:0.6368-0.8217)，TNM分期的AUC为0.6111(95％CI:0.5044-0.7229)，lncRNA panel对肺腺癌预后的预测能力显著优于TNM分期（P＜0.05）。
将lncRNA panel与TNM分期系统相结合构建预测肺腺癌复发的联合模型，以3年为截点时，联合模型在总样本集中的AUC为0.7474(95％CI:0.6745-0.8198);以5年为时间截点时，AUC为0.7670(95％CI:0.6723-0.8564)。联合模型与TNM分期比较，预测能力显著优于TNM分期（P均＜0.05），联合模型与单独lncRNApanel的预测能力比较，无显著性差异（P均＞0.05）。
6.Transwell迁移和侵袭实验结果显示，lncRNA panel中的6个分子对肺腺癌细胞的迁移及侵袭能力均有影响，以LINC02323促进肺腺癌细胞迁移和侵袭的作用最为明显。
结论:
1.本研究通过分析TCGA数据库，首次系统筛选了与肺腺癌转移密切相关的lncRNAs标志物，进一步结合分子预后分析，构建了由6个lncRNAs分子构成的lncRNA panel，后者作为肺腺癌复发预测模型，是独立预后因素，其预测效能显著优于传统的TNM分期系统，具有重要临床应用价值。
2.该lncRNA panel中的6个分子与肿瘤转移及患者预后密切相关，提示其可作为转移癌的潜在治疗靶点。
第二部分 LINC02323参与肺腺癌转移的相关分子机制研究
目的:
基于第一部分肺腺癌转移相关lncRNAs标志物的筛选及其预后模型构建的研究，我们进一步对模型分子进行功能解析，重点探讨LINC02323在转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）调控的肺腺癌细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)中的分子生物学作用机制。
方法:
1.分析LINC02323表达的临床价值。
2.观察LINC02323表达对肺腺癌细胞生物学行为的影响。
3.研究LINC02323在TGF-β调控的肺腺癌细胞EMT中的分子生物学作用机制。
结果:
1.StarBase v2.0软件分析结果显示，LINC02323在肺腺癌、肺鳞状细胞癌、膀胱移行细胞癌、胰腺癌、肝细胞癌、肾乳头状细胞癌、结肠癌和胆管癌等多种肿瘤组织中的表达水平显著高于正常组织（P均＜0.05）;Kaplan-Meier生存分析显示，LINC02323高表达与肺腺癌患者的不良预后相关，高风险组患者和低风险组患者的RFS存在显著差异（log-rank test，P＜0.001）。
2.核质分离实验结果显示，LINC02323在细胞质和细胞核中都有分布，分布比例分别是44.49％和55.51％; MTT实验结果显示，与对照组相比，LINC02323干扰和过表达后，肺腺癌细胞增殖活力没有显著变化（P均＞0.05）;Transwell小室实验结果显示，与对照组相比，干扰和过表达LINC02323后，肺腺癌细胞的迁移及侵袭能力有显著变化（P均＜0.05）。
3.RT-qPCR和Western blot结果显示，TGF-β可以诱导肺腺癌细胞发生EMT过程，同时上调LINC02323的表达;LINC02323在肺腺癌细胞中干扰或过表达后，显著影响了TGF-β诱导的EMT过程;生信预测结果表明，LINC02323与miR-1343-3p之间存在靶向结合位点，miR-1343-3p可直接结合转化生长因子β受体Ⅰ（transforming growth factor-β receptor1，TGFBR1）基因3-UTR; TCGA转录组表达谱数据分析结果显示，LINC02323与miR-1343-3p在肺腺癌组织中的表达呈负相关(P＜0.05);双荧光素酶报告系统和RT-qPCR实验验证了LINC02323可以与miR-1343-3p靶向结合，miR-1343-3p可以和TGFBR1基因3-UTR靶向结合;通过拯救实验，发现抑制miR-1343-3p可以拯救下调LINC02323对肺腺癌细胞EMT、迁移和侵袭的影响，即LINC02323可以作为ceRNA，通过“海绵样作用”竞争结合miR-1343-3p，间接调节TGFBR1的表达，促进肺腺癌细胞EMT的发生及其转移能力的提高。
结论:
1.本研究首次发现，LINC02323在包括肺腺癌在内的多种肿瘤组织中高表达，与肺腺癌不良预后密切相关，提示其可能发挥重要的促癌功能。
2.LINC02323通过调节肺腺癌细胞中的miR-1343-3p-TGFBR1轴参与TGF-β调控的肿瘤细胞EMT过程，说明该分子是肺腺癌侵袭转移过程中的关键分子，可作为抗肿瘤转移治疗的潜在靶点。