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目的: 分析急性髓细胞白血病细胞系(HL-60)和慢性粒细胞白血病细胞系(K562)以及白血病患者骨髓标本中异常细胞CD71(转铁蛋白受体1)和Ki-67(肿瘤增殖性核抗原)的表达情况以及两者在评价细胞增殖活性方面的关系,探讨以CD71代替Ki-67作为白血病肿瘤细胞增殖活性指标的可行性。 方法: (1)细胞培养及骨髓标本的收集:培养HL-60细胞和K562细胞,绘制生长曲线,选取处于对数生长期的细胞;搜集2013年5月~2014年1月郑州大学第一附属医院中未经治疗的白血病患者的骨髓标本。 (2)CD71和Ki-67的表达情况及其阳性表达率的关联性分析:用只破膜以及破膜和标记相应的同型对照抗体的同一种肿瘤细胞样本调节流式细胞仪的电压和补偿,以进行破膜和标记Ki-67-FITC和CD71-PE的肿瘤细胞作为实验组,检测这些肿瘤细胞胞膜表面CD71蛋白和胞核中Ki-67蛋白的表达情况,并对CD71和Ki-67蛋白阳性表达率的相关性进行分析。 (3)细胞增殖周期的分析:以肿瘤细胞系作为实验组,以淋巴细胞分离液提取的正常人外周血中的淋巴细胞作为对照组,依次经过固定和碘化丙啶(PI)标记后,用流式细胞仪检测并用细胞周期分析软件——ModFitLT分析肿瘤细胞中DNA含量的变化,计算出S期细胞比率(SPF),确定肿瘤细胞的增殖活性,分析CD71的阳性表达率与SPF的关系。 结果: (1)K562细胞和HL-60细胞的SPF均较对照组的SPF显著升高(p<0.05)。K562细胞的SPF值较HL-60的SPF值低(p<0.05)。 (2)K562细胞和HL-60细胞CD71的阳性表达率与SPF均呈正向线性相关(p<0.05)。 (3)K562细胞和HL-60细胞CD71的阳性表达率明显高于Ki-67的阳性表达率(p<0.05),其差值分别为32.35533±1.0022954和28.822857±2.264420;K562细胞和HL-60细胞中CD71的阳性率与Ki-67阳性率均呈线性相关(p<0.05)。 (4)7例急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓标本中均不同程度地表达CD71,阳性率为(18.8629±12.27112)%;6例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓标本中也均不同程度地表达CD71,阳性率为(24.072857±20.9185673)%。AML组异常细胞CD71与Ki-67的阳性表达率无统计学意义(p>0.05),ALL组异常细胞CD71与Ki-67的阳性表达率有统计学意义(p<0.05) 结论: (1)随着Ki-67表达强度的增高,K562细胞和HL-60细胞CD71的表达强度逐渐加强;与细胞增殖活性的变化相一致,HL-60细胞CD71的表达强度强于K562细胞;白血病患者骨髓中异常细胞均不同程度地表达CD71。因此,CD71可以作为肿瘤细胞增殖活性的指标。 (2)HL-60细胞和K562细胞中CD71的阳性表率与Ki-67的阳性表达率存在正向线性相关,且CD71的表达强度高于Ki-67,这为临床用CD71代替Ki-67检测白血病、淋巴瘤及其他肿瘤细胞的增殖活性奠定了理论基础。