论文部分内容阅读
章鱼(Octopus)是一种海洋软体动物,广泛分布于渤海、黄海、东海和南海等海域,章鱼多糖和糖蛋白能够促进小鼠脾细胞增殖,增强免疫抑制小鼠的非特异性免疫功能,具有免疫调节的作用。本文以短蛸的胴体和腕部鲜肉为原料,通过多种提取和分离技术,分别获得了短蛸胴体冷水提组分(WBP-1a、WBP-1b、WBP-2a、WBP-2b)、短蛸胴体酶提组分(EBP-1a、EBP-1b、EBP-2a、EBP-2b)、短蛸腕部冷水提组分(WFP-1a、WFP-1b、WFP-2a、WFP-2b)、短蛸腕部酶提组分(EFP-1a、EFP-1b、EFP-1c、EFP-2a、EFP-2b)共17种多糖组分,并采用多种化学分析及现代仪器分析技术,初步确定了EFP-1a和WFP-2b降解三糖的化学结构,另外对EFP-2a和WFP-2b两个组分进行了化学修饰。
采用冷水提取、联合酶解的方法依次对短蛸胴体和腕部进行提取,对提取得到的多糖组分WBP、WFP、EBP、EFP分别进行了初步的理化性质研究。其重均分子量分别为162.6 kD、266.4 kD、139.1 kD和127.9 kD。PMP衍生高效液相色谱法测得EFP分离纯化得到的组分EFP-1a的单糖组成只含有葡萄糖(Glc),WFP分离得到的组分WFP-2b和EFP分离得到的组分EFP-2a的单糖组成比较复杂,含有葡萄糖胺(GlcN)、氮乙酰氨基半乳糖(GalNAc)、甘露糖(Man)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖(Gal)和盐藻糖(Fuc)。
对EFP和WFP分别采用Q Sepharose 4 Fast Flow离子交换层析柱和Sepharcryl S300凝胶排阻层析柱进一步纯化,得到了EFP-1a、EFP-2a和WFP-2b具有较高纯度的多糖组分。经测定,其重均分子量为101.8 kD、6.7 kD和28.2 kD,糖含量为92.3％、17.0％和17.0％,蛋白含量为1.9％、22.7％和15.7％,糖醛酸含量为19.9％、8.8％和14.1％,硫酸根含量为3.3％,4.9％和8.0％,在对三者基本理化性质进行研究的基础上,对EFP-1a采用全水解、PMP衍生高效液相色谱法、甲基化反应等多种化学分析方法和HPLC、IR、UV、NMR和GC-MS等现代仪器分析技术对其结构进行深入研究,证实EFP-1a为α-葡聚糖,主链为-1,4-键型,分子中含有少量的-1,2-键型。采用部分酸水解法将WFP-2b降解成寡糖片段、辅以TLC薄层色谱层析检测确定降解条件,采用Bio-Gel P6凝胶柱进行分离,对得到的三糖片段(WFP-2b3)的结构采用HPLC、MS和NMR仪器分析技术进行研究,结果表明WFP-2b3由GlcUA、Fuc和GalNAc组成,连接方式为:GlcUAβ1→4(GalNAcα1→03)Fuc,其中Fuc处于还原端,α和β构型相互转换。
为提高EFP-1a和WFP-2b的药用价值,本文采用三氧化硫-吡啶法对其进行硫酸酯化修饰,产物经纯化后得到了硫酸酯化衍生物(EFP-1aS和WFP-2bS)。经测定,WFP-2bS的硫酸根含量为33.3％。
虽然章鱼多糖的药理活性研究已有报道,但有关章鱼多糖,特别是对其分离纯化和结构分析方面的研究报道尚不多见。本文分别对短蛸多糖WBP、WFP、EBP、EFP、EFP-1a、EFP-2a和WFP-2b进行了初步研究,通过对短蛸腕部酶提组分EFP-1a较系统的研究和对短蛸腕部冷水提组分EFP-2a和WFP-2b化学修饰的研究,可以为短蛸多糖的进一步研究与开发和构效关系的深入研究提供参考和借鉴。