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目的:五味子是木兰科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果实。味酸、甘,性温,入肺、心、肾经,具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效,在临床上主要应用于治疗久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、久泻不止、自汗盗汗、津伤口渴、内热消渴、心悸失眠等证[1]。五味子常见的炮制品种为酒五味子、醋五味子。传统中医理论认为五味子“入补药熟用,入嗽药生用”[2],即五味子生熟异用,然而“入补药熟用”指的是五味子哪种炮制品未见明确记载。本文在课题组前期研究基础上,从五味子不同炮制品中化学成分的比较、“入补药”的药效作用等方面进行研究,为临床上五味子“入补药熟用”的合理使用提供实验参考。材料与方法:材料:五味子饮片,购自辽宁省丹东市大梨树村五味子GAP基地,经由辽宁中医药大学药学院药用植物教研室王冰教授鉴别为北五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果实。方法:1.五味子不同炮制品中5-羟甲基糠醛的含量比较采用高效液相色谱法,Ecosil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相:乙腈-水（5:95）等度洗脱;检测波长284 nm;流速1 mL·min-1;进样量10μL;柱温30℃,测定生五味子、酒五味子、醋五味子中5-羟甲基糠醛（5-HMF）的含量。2.五味子不同蒸制时间5-羟甲基糠醛的含量变化采用高效液相色谱法,以5-羟甲基糠醛（5-HMF）的含量为指标,以不同蒸制时间为考察因素,比较生五味子,酒五味子和醋五味子中5-羟甲基糠醛（5-HMF）成分的含量变化。3.GC-MS分析五味子不同炮制品中挥发油成分采用气相色谱质谱联用仪（GC-MS）,离子源温度210℃、传输线温度210℃,进样口温度220℃,流量1 mL/min,分流比50,程序升温;分析生五味子、酒五味子、醋五味子中挥发油成分,得到总离子流图。对总离子流图中的各个峰经过质谱扫描（50℃保持1 min,以10℃/min升温到220℃,扫描60-400 amu）后得到质谱图。4.五味子不同炮制品对肾阳虚模型大鼠作用研究采用灌胃甲巯咪唑水溶液制备大鼠肾阳虚模型,肾阳虚模型成功后,随机将这些大鼠分为模型组、右归丸组（阳性对照组）、生五味子组、酒五味子组、醋五味子组,另外设置空白对照组,共分成6个实验组,每组各有大鼠10只。连续灌胃甲巯咪唑水溶液15天后,各给药组从第16天开始给予相应的药液,连续灌胃给药30天后,处死大鼠,试剂盒ELISA法测定各组大鼠血清中游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离四碘甲状腺原氨酸（FT4）、促甲状腺素（TSH）、一氧化氮（NO）、促甲状腺激素释放激素（TRH）的含量;试剂盒ELIS法测定大鼠血浆中环磷酸腺苷（cAMP）及环磷酸鸟苷（cGMP）的含量,并计算cAMP/cGMP二者之间的比值;显微镜下观察各组大鼠的甲状腺组织病理形态,从而比较五味子不同炮制品对肾阳虚模型大鼠的改善作用。5.五味子不同炮制品对肾精亏虚模型大鼠作用研究采用灌胃雷公藤多苷片水溶液制备大鼠肾精亏虚模型,并将成模后的大鼠随机分为模型组、生五味子组、酒五味子组、醋五味子组,另外设置空白对照组,共分成5个实验组,每组各有10只大鼠。连续灌胃给药30天后,处死大鼠,精密称量大鼠附睾及肾组织的质量;试剂盒ELISA法测定大鼠血清抑制素INH-B和血清卵泡刺激素（FSH）的含量;显微镜下观察大鼠睾丸组织病理形态,计算生精细胞Johnson评分及生精细胞凋亡率（AR）,从而比较五味子不同炮制品对肾精亏虚模型大鼠的治疗作用。6.五味子不同炮制品对过氧化氢致受损肾细胞的修复作用研究选取肾细胞作为体外细胞模型,采用cck-8法确定五味子不同炮制品的增殖率,筛选出五味子最佳给药浓度;肾细胞采用过氧化氢（H2O2）造模,待肾细胞受到损伤即造模成功后,给予最佳浓度的五味子不同炮制品的药液,试剂盒ELISA法测定细胞上清中骨成型蛋白7（BMP-7）、肝细胞生长因子（HGF）、血管内皮生长因子（VEGF）的含量,从而比较五味子不同炮制品对受损肾细胞的修复作用。7.五味子不同炮制品对脂多糖刺激的RAW264.7小鼠巨噬细胞的作用研究选取RAW264.7小鼠巨噬细胞作为体外细胞模型,采用脂多糖（LPS）造模,采用cck-8法确定五味子不同炮制品对LPS刺激的RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖率,筛选出五味子最佳给药浓度;酶标仪测定不同浓度的五味子不同炮制品对LPS刺激的RAW264.7小鼠巨噬细胞的相对吞噬率;试剂盒ELISA法测定LPS刺激的RAW264.7小鼠巨噬细胞细胞上清中TNF-α、IL-Iβ、NF-kB的含量,从而比较五味子不同炮制品对LPS刺激的RAW264.7小鼠巨噬细胞的修复作用。结果:1.五味子不同炮制品中5-羟甲基糠醛的含量比较五味子在炮制过程中会发生美拉德反应,可以产生新的成分5-羟甲基糠醛（5-HMF）。生五味子中未能检测到5-HMF,经过蒸制后,酒五味子中5-HMF含量约为0.86%,醋五味子中含量约为0.60%。2.五味子不同蒸制时间5-羟甲基糠醛的含量变化采用不同蒸制时间蒸制五味子,得到五味子不同炮制品,测得五味子中5-羟甲基糠醛（5-HMF）的含量不同;随着蒸制时间的延长,酒五味子和醋五味子中5-羟甲基糠醛（5-HMF）的含量增多。3.GC-MS分析五味子不同炮制品中挥发油成分五味子不同炮制品中挥发油的含量不同,炮制后,挥发油的含量减少;五味子不同炮制品里面挥发油的成分有差异,生五味子中挥发油成分最多,为41种,其次是酒五味子为37种,醋五味子中有30种,其中三者共有挥发油成分14种。生五味子中的13种挥发油成分,经炮制后消失,在酒五味子和醋五味子均未检到;炮制后亦有新增成分产生,酒五味子新增挥发油成分6种,醋五味子5种。4.五味子不同炮制品对肾阳虚模型大鼠作用研究与模型组相比,五味子各炮制品均能从不同程度上提高大鼠血清中FT3、FT4、NO及下丘脑TRH水平,降低大鼠血清TSH水平（P<0.05、0.01）;均能提高大鼠血浆中cAMP含量,降低血浆中cGMP水平（P<0.05、0.01）,cAMP/cGMP比值升高;五味子不同炮制品之间相比较,以酒五味子作用效果最优（P<0.01）;五味子各炮制品对肾阳虚模型大鼠甲状腺病理形态均有改善作用,酒五味子和醋五味子的效果优于生五味子组。5.五味子不同炮制品对肾精亏虚模型大鼠作用研究与模型组比较,给药后的各组大鼠的附睾及肾的质量均有所增加（P<0.01）;与模型组比较,各给药组均能不同程度提高大鼠血清中INH-B以及血清FSH水平（P<0.01）,其中以酒五味子的作用效果最好;五味子不同炮制品均可以改善肾精亏虚模型大鼠睾丸组织的病理形态,且酒五味子和醋五味子效果好于生五味子组。6.五味子不同炮制品对过氧化氢致受损肾细胞的修复作用研究随着给药浓度的增加,五味子生制品对肾细胞增殖率的促进作用呈上升趋势,在500μg·mL-1时肾细胞增殖率最高,且可看出制品增殖率高于各生品组,酒五味子增殖率最高;与模型组相比,各给药组BMP-7、VEGF、HGF含量均显著升高;与生品组之间比较,制品组的BMP-7、VEGF、HGF含量显著升高,其中酒五味子效果最好。7.五味子不同炮制品对脂多糖刺激的RAW264.7小鼠巨噬细胞的作用研究随着给药浓度的增加,五味子不同炮制品对RAW264.7小鼠巨噬细胞增殖率的促进作用呈现上升的趋势,在浓度为100μg·mL-1时,增殖率最高,且可看出制品增殖率高于各生品组,酒五味子增殖率最高;随着给药浓度的增加,五味子不同炮制品对RAW264.7小鼠巨噬细胞的吞噬促进作用呈现下降的趋势,在浓度为500μg·mL-1时,RAW264.7小鼠巨噬细胞的吞噬率最高,且可看出制品的吞噬率高于各生品组,且酒五味子的吞噬率最高;模型组的TNF-α、IL-1β、NF-kB均显著下降,与模型组相比,各给药组TNF-α、IL-1β、NF-kB含量均显著升高,与生品组之间比较,制品组的TNF-α、IL-1β、NF-kB含量显著升高,且酒五味子效果最好。结论:五味子经过蒸制（酒蒸或醋蒸）,产生新增成分5-羟甲基糠醛（5-HMF）,推测五味子蒸制过程中发生了美拉德反应。随蒸制时间的延长,5-羟甲基糠醛含量增加,可作为炮制程度的判断指标。炮制后,五味子挥发油含量减少,挥发油组成发生改变。酒五味子对肾阳虚模型大鼠、肾精亏虚模型大鼠的治疗作用,以及对受损肾细胞、小鼠巨噬细胞的修复作用均优于生五味子、醋五味子,具有明显的补益作用,“入补药熟用”宜选用酒五味子。