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目的探索卵圆细胞体外长期培养的方法,明确GPC3是否通过活化Wnt/β-catenin信号通路促进异质卵圆细胞亚群恶性转变,以期为阻断肝癌发生发展提供治疗靶点。方法1.构建2-AAF/PH模型分离大鼠异质卵圆细胞,用含10%FBS、20ng/ml EGF、10ng/ml LIF的DMEM/F12(1:1)培养基体外长期培养,后撤去EGF、LIF,通过形态学的观察和分子标志物ALB、CK-19、 AFP的检测判断其是否仍保持干/祖细胞潜能；2.用携带GPC3基因的质粒转染肝癌细胞HepG2,运用western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中中心分子β-catenin和靶基因c-myc、cyclinD1的表达,判定Wnt/β-catenin信号通路的活化情况,并采用MTT实验对比转染组与未转染组HepG2的增殖速度；3.用构建的携带GPC3-EGFP嵌合基因的质粒转染分离培养的肝卵圆细胞,运用western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中中心分子β-catenin和靶基因c-myc、cyclinD1的表达情况,观察Wnt/p-catenin信号通路的活化情况。结果1.含EGF、LIF的培养基体外培养所分离的卵圆细胞四个月后,其仍能表达肝细胞标志物ALB、胆管上皮细胞标志物CK-19,具备双向分化潜能；而经不含EGF、LIF的培养基继续培养后,卵圆细胞胎肝标志AFP表达量迅速下降；2.过表达GPC3的HepG2细胞GPC3转染组较未转染组其Wnt/p-catenin信号通路中心分子β-catenin和靶基因c-myc、cyclinD1的表达明显上升,且转染组增殖率较未转染组增加(P<0.05)；3.转染GPC3的卵圆细胞组和未转染组GPC3表达量和Wnt/p-catenin信号通路活化程度未发现存在明显差异(P>0.05)。结论1.本研究所分离的卵圆细胞在含10%FBS、20ng/ml EGF、10ng/ml LIF的DMEM/F12(1:1)培养基中可长期增殖并保持干细胞活性；2.GPC3促进肝癌细胞HepG2的生长很可能通过过度活化Wnt/β-catenin信号通路实现；3.GPC3是否通过活化Wnt/β-catenin信号通路促进异质卵圆细胞亚群恶性转变仍待验证。