论文部分内容阅读
目的:结肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,晚期结肠癌转移者无法手术,而传统放化疗缺乏针对性,产生的严重毒副作用常常导致治疗失败。本课题选择苦参碱(Mt)作为模型药物,以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,在包载 Mt 的纳米粒表面结合能识别结肠肿瘤细胞的麦胚凝集素(WGA),使药物对癌细胞发挥特异杀伤作用,为口服结肠癌靶向给药系统的研究奠定基础。 方法:(1)苦参碱纳米粒(Mt-NPS)制备工艺的研究 采用复乳化-溶剂挥发法制备苦参碱纳米粒,通过星点实验设计,以粒径、粒度分布、电位、包封率和载药量为评价指标筛选最佳制备工艺。(2)麦胚凝集素修饰苦参碱纳米粒(WGA-Mt-NPs)的制备工艺研究 采用碳二亚胺法制备 WGA-Mt-NPs,通过均匀试验设计,以粒径、粒度分布、电位和修饰率为评价指标筛选最佳制备工艺,透射电镜观察修饰前后粒径大小和形态的变化。(3)结肠癌细胞(HT-29)生长曲线的测定和细胞毒作用研究 采用四唑盐比色法(MTT),比较WGA-Mt-NPs与Mt-NPs对结肠癌HT-29的细胞毒作用,分别考察各组在固定培养时间抑制 HT-29 细胞的量-效关系,固定给药浓度各组抑制HT-29细胞的时-效关系,及各组不同浓度对HT-29细胞毒性作用,以OD值为指标研究Mt-NPs用WGA修饰前后对结肠癌HT-29细胞的细胞毒作用。 结果:通过星点实验设计-效应面法确定出Mt-NPS的最佳制备工艺为:PLGA与Mt 的比例为 0.594:1,转速 815rpm/min,PVA 浓度为 0.46%;均匀实验设计确定出WGA-Mt-NPS的最佳制备工艺为:碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDAC/NHS)浓度比为2.8:0.12,凝集素加入量3mg/25ml,孵化14h;MTT法表明WGA-Mt-NPS和Mt-NPS对HT-29细胞均产生抑制作用,而WGA-Mt-NPS对细胞产生的抑制作用强于Mt-NPS。 结论:通过对Mt-NPs、WGA-Mt-NPS制备工艺研究和对结肠癌HT-29细胞的细胞毒作用考察,结果表明,其制备工艺可行,纳米粒性质稳定,麦胚凝集素对载药纳米粒修饰后,细胞毒作用明显增强。