灵芪胶囊对人源性直结肠癌lovo细胞HGF/SF-met信号转导通路关键位点的研究

来源 :黑龙江中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:jerry_007_
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目的:(1)观察灵芪胶囊对人源性直结肠癌lovo(?)胞体外的抑制作用。(2)研究灵芪胶囊对诱导lovo细胞发生凋亡。(3)观察灵芪胶囊作用下lovo细胞形态学变化的影响。(4)针对直结肠癌相关的HGF/SF-met信号转导通路,进行灵芪胶囊抗肿瘤机制的研究。方法:体外培养人源性直结肠癌lovo细胞,MTT法检测灵芪胶囊对lovo细胞体外的抑制作用,绘制细胞生长曲线。Hochest33342法观察细胞的形态和凋亡情况。透射电镜观察药物作用下细胞形态变化的影响。针对HGF/SF-met信号转导通路上的关键位点进行研究,分别应用Western Blot法和real-time PCR检测HGF.PTK.c-met的含量,应用激光共聚焦检测免疫荧光染色后HGF.PTK.c-met的表达情况。确定灵芪胶囊对HGF/SF-met信号转导通路的影响极其抗肿瘤的机制。结果:通过体外实验的研究发现,灵芪胶囊对人源性直结肠癌lovo细胞具有一定抑制作用,其中72h灵芪胶囊高剂量组的作用最为明显,其抑制率可达31.65%,与对照组比较差异具有显著性意义。透射电镜表明灵芪胶囊对lovo细胞形态学有一定的影响,流式细胞仪检测说明灵芪胶囊能够诱导肿瘤细胞发生凋亡,其中灵芪胶囊高剂量组凋亡率最高,为19.64%,与对照组比较差异具有显著性意义。应用Real-time PCR及Western blot技术和激光共聚焦显微镜针对肿瘤凋亡相关的HGF/SF-met通路进行研究,结果表明,灵芪胶囊诱导肿瘤细胞发生凋亡的作用与该通路相关,能够抑制直结肠癌中HGF与c-met的联合表达,从而抑制HGF/SF-met通路诱导肿瘤细胞的凋亡。结论:灵芪胶囊对人源性直结肠癌lovo细胞体外具有一定的抑制作用,能够诱导lovo细胞的凋亡发生。其作用机制可能与HGF/SF-met信号转导通路有关,通过抑制HGF/SF-met信号转导通路上的关键位置HGF、PTK、c-met,从而抑制HGF/SF-met信号转导通路,达到抑制直结肠癌的作用。为今后临床上抗肿瘤提供了新的思路和理论依据。
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