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第一部分：胰腺癌MAPK与PI3K信号通路存在串话目的：研究胰腺癌MAPK与P13K信号通路间是否存在串话及其作用方式。方法：分别向胰腺癌BxPC3、 PANC1细胞株中加入MAPK通路抑制剂PD98059或P13K通路抑制剂LY294002干预1 h,免疫印迹方法检测p-ERK、 ERK、 p-Akt、 AKt的蛋白表达水平。应用siRNA方法降低ERK表达水平,免疫印迹方法检测p-Akt、Akt的蛋白表达水平。结果：应用MAPK抑制剂抑制BxPC3、 PANC1细胞ERK活性后,p-Akt表达水平反而升高。使用siRNA转染BxPC3、 PANC1细胞沉默ERK的表达同样可以使p-Akt的蛋白表达水平升高。结论：胰腺癌MAPK, PI3K信号通路间存在串话,ERK的活化可以抑制PI3K/Akt信号通路的激活。第二部分：FoG2在胰腺癌中的表达及其在MAPK、 PI3K信号通路串话中的作用目的：研究FOG2在胰腺癌组织中的表达,及其调控MAPK、 PI3K信号通路串话的机制。方法：采用免疫组织化学方法检测108例临床胰腺癌样本中FOG2的蛋白含量。使用免疫印迹方法检测多种胰腺癌细胞株FOG2的蛋白表达水平,选择FOG2高表达细胞株a应用慢病毒颗粒转染胰腺癌细胞降低FOG2表达,对照组应用空白慢病毒载体。分别应用MAPK和P13K抑制剂抑制通路活性,免疫印迹方法检测p-ERK.ERK、p-Akt,Akt的蛋白表达水平。通过免疫共沉淀(Co-IP)方法,检测ERK与FOG2有无结合。结果：61.1%(66/108)患者的胰腺癌组织FOG2表达水平要强于对应的癌旁组织。FOG2在BxPC3、PANC1细胞中呈高表达。在对照组,抑制ERK的磷酸化可以显著增加Akt的磷酸化,活化的ERK可以抑制Akt的活化；应用慢病毒转染方法降低FOG2表达水平后,应用MAPK抑制剂抑制ERK活性,p-Akt的蛋白表达水平并没有明显变化。免疫共沉淀结果显示,ERK可以与FOG2特异性结合。结论：大多数胰腺癌肿组织中FOG2蛋白的表达水平要强于癌旁组织。ERK通过与FOG2特异性结合来调控Akt的活化。沉默FOG2可以干扰ERK对Akt信号通路的抑制作用。FOG2是调控胰腺癌MSPK、 PI3K信号通路串话的重要分子。第三部分：沉默FoG2对MAPK抑制剂作用效果的影响目的：研究沉默FOG2对MAPK抑制剂抑制胰腺癌细胞生物学行为的能力有无影响。方法：向慢病毒稳定转染的BxPC3、PANC1细胞中加入MAPK抑制剂,采用Transwell小室测定BxPC3、PANC1细胞的定向迁移能力,Flow Cytometry检测BxPC3、 PANC1的凋亡比例,采用平板克隆形成实验测定BxPC3、 PANC1细胞的成瘤能力,MTT检测BxPC3、 PANC1增殖能力。结果：Transwell assay结果显示,虽然沉默FOG2对BxPC3、 PANC1细胞的定向迁移能力没有明显影响,但沉默FOG2表达后,无论是单用MAPK通路抑制剂还是与P13K通路抑制剂联合应用,其抑制BxPC3、 PANC1细胞迁移的能力均得到增强。流式细胞术和平板克隆形成实验结果分别提示沉默FOG2可以增强PD98059对BxPC3、 PANC1细胞的促凋亡作用和抑制BxPC3、 PANC1细胞成瘤的能力。MTT结果显示,沉默FOG2后,PD98059抑制BxPC3、 PANC1细胞增殖的作用强度和持续时间均得到增强。结论：沉默FOG2可以增加胰腺癌细胞对ERK抑制剂的敏感性,可以增强MAPK抑制剂抑制BxPC3、 PANC1细胞增殖、存活、定向迁移和集落形成的能力。