鸡沙门氏菌病是引起鸡感染的常见传染病之一,分为鸡白痢、鸡伤寒和鸡副伤寒。这三种沙门氏菌病对养鸡业的危害极大。随着抗生素在动物感染和人类保健中的大量使用,近20年来沙门氏菌对抗菌药物的耐药性在稳定的增长,特别是沙门氏菌多重耐药的不断出现,已经成为公共卫生和农产品安全关注的热点。本试验旨在对重庆地区分离到的10株鸡源沙门氏菌进行鉴定的基础上分析其耐药谱、血清学分布、耐药质粒携带状况,并对其耐药基因进行了定位研究。1、用常规方法从重庆地区疑似沙门氏菌病鸡分离到10株沙门氏菌,通过生化反应对病原菌进行了初步鉴定;采用玻片凝集法,用30种沙门氏菌属诊断血清对分离菌进行了血清型分群,并根据沙门氏菌InvA基因序列设计一对引物,对分离菌InvA基因进行了PCR扩增。结果分离的10株病原菌属于4个血清群;A群的1株(S9),B群的1株(S6),C1群的2株(S1、S5),D群的6株(S2、S3、S4、S7、S8、S10)。优势血清群为D群,占60%;10株菌均扩增出了373bp大小的目的片段。2、根据NCCLS推荐的标准,用K-B法检测了分离菌对21种抗菌药物的敏感性。并用碱裂解法提取10株分离菌的质粒,通过电泳分析了其质粒携带状况,并分析了其耐药表型与质粒图谱之间的关系。结果表明:分离菌均具有较强的耐药性,对所试21种抗菌药物的耐药率达24%-71%。对青霉素、阿莫西林、红霉素、四环素、利福平等临床常用抗生素已经完全耐药,对复方新诺明、氨苄青霉素、氯霉素、环丙沙星和诺氟沙星的耐药也比较普遍,分别达80%、60%、60%、50%和50%;10株菌有6株(S1、S4、S6、S8、S9、S10)监测到了质粒的存在,质粒携带率为60%。S1有3种大小质粒(36 kb、15 kb、1.4 kb);S4有4种大小质粒(36 kb、6.8 kb、4.9 kb、2.2 kb);S6有3种大小质粒(36 kb、2.8kb、2.2 kb):S8有2种大小质粒(15 kb、1.8 kb);S9有5种大小质粒(36 kb、15 kb、6.8kb、3.6 kb、1.6 kb);S10有1种大小质粒(36 kb)。10株分离菌的耐药表型与其质粒携带状况之间不存在明显的对应关系。3、用变温—SDS法对携带质粒的菌株进行质粒消除,通过提取质粒电泳来检测质粒消除状况。对质粒消除后的菌株与未消除的菌株进行配对药敏试验,确定其携带质粒所编码的耐药基因。结果6株携带质粒的菌株在交替培养5次后,携带质粒均被完全消除,消除率达100%;质粒消除后菌株对大部分抗生素由耐药变为敏感,表明质粒是其耐药基因的主要载体,配对药敏试验表明S1株由质粒介导的耐药基因有阿莫西林、庆大霉素、红霉素、四环素、环丙沙星、诺氟沙星、氯霉素7种,占总耐药基因的47%;S4株由质粒介导的耐药基因有阿莫西林、红霉素、四环素3种,占总耐药基因的60%;S6株由质粒介导的耐药基因有阿莫西林、庆大霉素、红霉素、四环素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星、氯霉素9种,占总耐药基因的60%;S8由质粒介导的耐药基因有阿莫西林、红霉素、四环素、环丙沙星、氧氟沙星、氯霉素6种,占总耐药基因的60%;S9株由质粒介导的耐药基因有阿莫西林、红霉素、四环素、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、氯霉素9种,占总耐药基因的75%;S10株由质粒介导的耐药基因有阿莫西林、庆大霉素、红霉素、四环素、环丙沙星、氧氟沙星、氯霉素7种,占总耐药基因的64%。