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【研究背景及目的】同源异型盒基因是一类重要的调控细胞分化和形态发育的转录因子基因家族,其中HLX1基因与胚胎来源细胞和造血系细胞的增殖、分化行为密切相关。近年来研究陆续表明,HLX1基因对于正常胎盘形成起重要作用;HLX1蛋白在细胞滋养细胞来源的细胞系HTR-8/SVneo、SGHPL-4、JEG-3、JAR和BeWo的细胞中均有表达;病理妊娠如特发性胎儿宫内生长受限（FGR）的胎盘中HLX1基因表达水平明显降低。本研究旨在运用RNAi技术抑制滋养细胞株HTR-8/SVneo中HLX1基因的表达,探讨其对体外滋养细胞增殖和侵袭行为的影响,为HLX1基因异常表达可能参与FGR等病理妊娠的发病提供基础理论支持。【方法】1.复苏、培养人早孕期胎盘绒毛膜外滋养细胞株HTR-8/SVneo至对数生长期备用。2.应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western Blot方法检测HTR-8/SVneo细胞中HLX1 mRNA和蛋白质的表达。3.依据GeneBank中HLX1 cDNA序列号NM021958,设计并化学合成siRNA序列,分别为:4条特异性HLX1 siRNA的预混试剂;1条非特异性阴性对照siRNA试剂,DY-547荧光标记。4.HTR-8/SVneo细胞常规体外培养,设为三组:实验组（转染HLX1 siRNAs）、阴性对照组（转染阴性对照siRNA）以及空白对照组（除不含siRNA,余试剂与另两组均相同）,分别进行瞬时转染。5.将DY-547标记的阴性对照siRNA转染入HTR-8/SVneo细胞,应用流式细胞术（FCM）测定转染效率,筛选出转染效率最佳优化条件进行后续实验。6.应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western Blot方法分别检测三组细胞转染后HLX1基因mRNA和蛋白的表达,评价干扰效果。7.细胞增殖实验:将三组HTR-8/SVneo细胞以相同数量接种,过夜培养后进行瞬时转染,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法每隔24测定吸光度值后绘制生长曲线。8.细胞侵袭实验:应用Transwell小室检测转染后各组HTR-8/SVneo细胞穿透人工重组基底膜的能力。三组HTR-8/SVneo细胞以相同数量接种,过夜培养后进行瞬时转染,24小时后,用无血清培养液重悬细胞并以相同数量接种于包被有Matrigel基质胶的小室上室,下室加入20%FCS的培养液。继续培养24h,40倍镜下随机取5个视野计数穿膜细胞数。9.统计学方法:应用SPSS 11.0软件包进行统计分析,以均数±标准差（（?）±s）表示定量资料数据,组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）,认为P＜0.05有统计学意义。【结果】1.HLX1 mRNA和蛋白在HTR-8/SVneo细胞中均呈阳性表达。2.siRNA转染效率优化后可达（86.3±2.6）%,以相同条件进行后续实验。3.与空白对照组及阴性对照组相比,实验组转染HLX1 siRNAs后特异且有效地抑制了HTR-8/SVneo细胞中HLX1基因的表达,转染48h后HLX1 mRNA的表达降低（77.0±1.2）%（P＜0.01）,转染72h后HLX1蛋白的抑制率为（82.6±1.2）%（P＜0.01）。4.与空白对照组及阴性对照组相比,实验组转染HLX1 siRNAs后HTR-8/SVneo细胞的增殖活性下降,转染72h后增殖抑制效应最为显著,抑制率为（58.1±4.4）%（P＜0.01）。5.与空白对照组及阴性对照组相比,实验组转染HLX1 siRNAs后HTR-8/SVneo细胞穿过Matrigel基质胶的侵袭能力受到显著抑制,差异有统计学意义（P＜0.01）。【结论】HLX1 siRNAs可有效抑制人早孕期胎盘绒毛膜外滋养细胞HTR-8/SVneo中HLX1基因的表达,HLX1基因表达下降可以显著抑制滋养细胞的增殖活性和侵袭能力,它的表达异常可能通过影响滋养细胞增殖、侵袭等生物学性能而在FGR等病理妊娠的发病中起重要作用。