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黑须污蝇(Wohlfahrtia magnifica)主要引起母驼阴道蝇蛆病,是影响双峰驼健康发展的主要疾病之一,并且给养驼业带来严重的经济损失。每年的5-10月份发病,进入冬天病原自行消退,次年5月份再次复发。本实验旨在揭示黑须污蝇越冬行为及低温下存活率和低温转录组研究为寻找治疗黑须污蝇蝇蛆病的药物以及防治方法奠定基础,深入了解黑须污蝇生活史及转录组研究为控制虫害保障牧区生产生活具有潜在意义。本实验样品取自阿拉善和四子王旗当地黑须污蝇及其幼虫与蛹,分别将一期、二期、三期幼虫以及蛹和成蝇放入可调节温度的冰箱中,使其从室温缓慢降温直到4℃且不在活动,之后将其温度再缓慢升高,对其进行观察,一期、二期、三期幼虫以及蛹和成蝇是否有复苏现象;室温、4℃、-5℃、-10℃、-15℃、-24℃6个温度梯度,将6个温度梯度的蛹分别放入冰箱缓慢降温进行低温胁迫诱导,观察期孵化率;黑须污蝇蛹以及-5℃、-10℃低温胁迫蛹的转录组研究及热激蛋白基因q-PCR验证;通过上述实验得出以下结果:1、黑须污蝇以蛹的形式进行越冬。2、随着温度的降低蛹的羽化率也随之降低,但是在-5℃、-10℃和4℃羽化率相近且分别为48.75%,47.50%、50%。在-15℃羽化率呈断崖式下降且羽化率为3.75%,-24℃羽化率为0。3、通过低温胁迫诱导蛹与正常蛹转录组测序对比分析,NCBI_nr、GO、KEGG、Pfam、Swiss-Prot 和 eggNOG 数据库对比共注释到 39197 条 unigenes,其中 PA1vsPA 上调 13465 条 unigenes、下调 25648 条 unigenes、no84 条 unigenes,PA2vsPA 上调 14572 条 unigenes、下调 24578 条 unigenes、no47 条 unigenes。通过差异基因分析逐步筛选耐寒耐热相关基因HSPs家族基因Hsp23、Hsp27、Hsp67bc、Hsp70Ba、Hsph1、Hsp60、Hsp83、Hsp90AB1/AA1(log2FC>2、p<0.05)以及Hsp同源蛋白Hsc类基因Hsc70-5、Hsc70-4(log2FC>2、p<0.05)。选择表达量较高的 Hsp67bc、Hsp23、Hsp27、Hsc70-4、Hsp70Ba 5 个基因对其进行 q-PCR验证,Hsp27 表达差异极显著(p=0.009<0.01);Hsp23 差异显著(p=0.037<0.05);Hsc70-4 差异显著(p=0.026<0.05);Hsp70Ba 差异性显著(p=0.039<0.05);Hsp67Bc差异不显著(p=0.271>0.05)。本实验补充了黑须污蝇生活行为的研究,为后期研究提供基础。建立了黑须污蝇蛹不同温度下的转录组数据库,揭示了黑须污蝇蛹在低温下体内相关基因的表达变化,为后期深入研究提供基础。