论文部分内容阅读
随着人们卫生及环境意识的增强，环保、无公害药物的研制已经成为未来药物发展的主导方向。有毒植物是我国传统农药(包括杀螨剂)的主体，从有毒植物中寻找新的活性杀螨剂或杀螨药物前体，不仅是有效创制新药的经济、快捷途径，而且也是对有毒植物资源及植物毒素的合理开发与利用。本研究正是以此为出发点开展了活性筛选、成分预试、杀螨活性成分的跟踪分离、波谱分析与结构解析以及单体杀螨活性观察等工作，并取得了以下结果： 1．具有杀螨活性植物的筛选：采用点滴法离体杀螨试验观察了19种植物甲醇提取物对家兔耳痒螨(Psoroptes cuniculi)成虫的杀灭活性。试验结果表明，50％浓度的百部、桔皮、白鲜皮、苦参、苦楝皮、博落回和打破碗花花等7种植物的提取物均可在4h内杀死全部实验痒螨，其中百部和博落回只需1.8h和1.7h，杀螨活性最为突出，相当于4mg／L浓度的阿维菌素水溶液。 2．三种杀螨植物的化学成分预试：采用试管法博落回、打破碗花花和杠板归等三种植物的化学成分做了预试。试验结果表明，博落回的化学成分以生物碱为主，打破碗花花以皂甙类成分为主，杠板归主要化学成分为黄酮类和蒽醌类成分。 3．博落回杀螨活性成分的提取与初步分离：以5％盐酸甲醇反复冷浸博落回全草的干燥粗粉(3.5kg)，减压蒸去溶剂获得总提取物；总提取物用热水溶解，酸化，滤出不溶物M1(110g)，氯仿萃取出水相中脂溶性部分M2(30g)，继而碱化水相，氯仿萃出脂溶性部分M4(19g)，残余水相部分烘干得M3(100g)；对M1，M2，M3与M4四部分的杀螨活性检测结果表明，以生物碱为主要成分的M4部分杀螨活性最突出。 4．博落回杀螨活性成分的琅踪分离：M4样19g上硅胶柱，以氨水饱和的石油醚：乙酸乙酯：甲醇溶剂体系梯度洗脱(10：1：0～0：1：1)，每200mL收集一份，TLC监测成分的变化，合并成分相似者，将M4部分分为F1(1g)、F2(3g)、F3(5.5g)、F4(3g)与F5(3g)五个极性段；F2段柱层析，石油醚：乙酸乙酯：三乙胺(4：1：0.05)洗脱，得到F21与F22两个流分，F21再次经过柱层析后经甲醇／乙酸乙酯重结晶得到化合物MC3(无色针状结晶)，F22在石油醚：乙酸乙酯：三乙胺(4：1：0.2)体系中展开，TLC制备得到两个主要成分，经丙酮重结晶后得化合物MC6(淡黄色无定形粉末)与MC7(白色针状结晶)；F3段柱层析，以石油醚：乙酸乙酯：三乙胺(4：1：0.05)为初始溶剂逐渐增大极性洗脱，得到F31、F32与F33三个流分，F31柱层析，石油醚：二氯甲烷：丙酮(2：0.5：0.2)洗脱得化合物MC9(黄色针状结晶)，F32经乙腈重结晶后得到化合物MC1(白色无定形结晶)，F33上硅胶柱，石油醚：二氯甲烷：三乙胺(3：1：0.1)洗脱，甲醇重结晶得化合物MC2(五色柱状结晶)；F4段柱层析，石油醚：11 博落回杀螨活性成分的研究乙酸乙酯：三乙胺＊：1．5：0．1）洗脱得到 F4与 F42流分，F4经石油醚：乙酸乙酯 ：甲醇：三乙胺O．5：4：0．5：0＊展开薄层层析制备后得到化合物 MC（白色针状结晶），F42经氯仿重结晶得化合物 MC（黄色针状结晶卜 5．博落回生物碱理化常数的测定与波谱分析：通过熔点、比旋光度的测定，TLC检查以及m，EIMS，‘H NMR，‘七 NMR，DEpT等波谱学分析对几种化合物的结构进行解析，化合物 MCI，MCZ与 MC10分别被鉴定为普洛托品（ProtoPinX a拐隐品碱（a一allocryPto＊ine）与刁鬃碱（berberine），MC3，MC6，MC7，MCg与 MC 11的波谱学与博落回属植物己见报道的成分有较大不同，尚待进一步作出确切鉴定。化合物MC，熔点203～204C，比旋光度0，EIMS给出分于离子峰353，IR在1672处有吸收峰（碳基）罗二＊C NMR（CDCI，6巾p3）：31人 41．4日 46刀， 50．8， 57．5， 100．7目 101刀， 106．6，107．9，110．2，117．4，124．8，128＊，132．3，135．7，145．7，145．8，146二，147．9，DEPT谱显示一个甲基碳，六个亚甲基碳，四个次甲基碳与八个季碳，’H NMR（CDC13，sbo3） 1．98，2．3～3．l，3．3叶．0，5．93，5．95，6．65，6．71，6．91。化合物 MCZ，熔点 160～161℃，卜旋光度0，EIMS给出分子离子峰 369，IR在 1645处有吸收峰（碳基），‘3C NMR（CDCI，6／pp叫：31．9，41刁，的刀，SO．2，55．5，57．2，60石，101刀，109刀，门0．2，门0．5，127．4，128．1，129刀，132．3，135．5，146＊，147．l，147．9，151．4，DEPT谱显示三个甲基碳，五个亚甲基碳，四个次甲基碳与八个季碳，’H NMR（CDC13，6／pp ）：1．93，2．3－3．63，3．79，3．86，5．95，6．64，6．87，6．96。化合物MC10，熔点143叶，碘化秘钾试剂显色阳性，与小聚碱标准样品 TLC时 Rf值相同，混合样熔点不下降。 6．博落回中8个生物众单体的杀螨活性观察：通过体外杀螨试验观察了8个生物碱单体在不同浓度下对家兔耳痒螨成虫的杀灭效果，结果表明普洛托品显示出较好的杀螨活性，1％浓度 3小时，0．5％浓度 7小时可杀死全部试验螨虫，效果稍逊于百里酚，同时化合物MCg、小劈碱以及FS极性段也显示出微弱的杀螨活性。 综上所述，本研究得出以下结