目的:长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200 nt的非编码RNA分子,在多种层面调控基因的表达,涉及到各个系统的多种器官,广泛参与机体的生理和病理过程。近年的研究相继发现了一些在肿瘤组织中异常表达的lncRNA,且以lncRNA上调者为多见。但绝大多数lncRNA的功能及作用机制尚不明确。本实验室前期研究表明RSU1P2在宫颈癌组织中高表达,提示其可能发挥癌基因作用。本课题从探寻lncRNA RSU1P2的功能出发,阐明其在宫颈癌细胞中的作用及具体机制,并初步探究其异常表达的调控机制,这将为宫颈癌发生发展的分子机制提供新的理论基础,也为宫颈癌的诊断和治疗提供新的线索。方法:首先,在人宫颈癌HeLa和C33A细胞中过表达或敲降RSU1P2后,分别应用MTT实验、平板克隆形成实验、Transwell细胞迁移侵袭实验、血管拟态形成实验检测RSU1P2对宫颈癌细胞恶性表型的影响,并利用流式细胞术和Western blot实验分别检测RSU1P2对宫颈癌细胞的细胞周期和上皮间质转化(EMT)的影响;其次,利用生物信息学方法预测可能靶定RSU1P2的候选microRNA(miRNA),并利用荧光报告载体实验结合qRT-PCR技术验证let-7a对RSU1P2的直接调控作用;然后通过生物信息学方法并参考文献报道,筛选let-7a下游可能的靶基因,并利用荧光报告载体实验结合qRT-PCR和Western blot技术验证let-7a对其靶基因的直接调控作用及其可能的调控方式;接下来在HeLa细胞中过表达或敲降RSU1P2后,应用qRT-PCR和Western blot技术验证RSU1P2对let-7a的下游靶基因的竞争性调控作用,并利用qRT-PCR技术检测在RSU1P2高表达的14对宫颈癌及其癌旁组织中let-7a及其靶基因的表达水平;而后,利用荧光报告载体实验检测RSU1P2是否以miRNA依赖的途径对靶基因进行调控;最后,采用生物信息学方法预测RSU1P2上游存在可能的启动子区域,同时结合转录因子预测软件预测可能与之结合的潜在转录因子,通过qRT-PCR技术检测改变MYCN的水平对RSU1P2及let-7a表达水平的影响。结果:细胞功能学实验表明RSU1P2能够促进宫颈癌细胞HeLa和C33A的细胞活性、生长、诱导细胞周期G1/S期转化,促进EMT、细胞侵袭和转移,以及血管拟态形成从而发挥促癌基因的作用;生物信息学预测发现RSU1P2转录本具有多个miRNA的潜在结合位点,荧光报告载体实验和qRT-PCR技术验证let-7a直接靶定并负性调控RSU1P2;筛选并证实了 let-7a发挥作用的下游靶基因IGF1R、MYCN、EphA4 及 C14orf28;在 HeLa 细胞中,RSU1P2 能够促进基因IGF1R、MYCN、EphA4及C14orf28的表达,并与内源性let-7a的表达水平呈负相关,同时临床标本分析验证了这一调控关系;RSU1P2通过miRNA依赖的途径对靶基因进行调控;初步分析潜在转录因子MYCN对RSU1P2具有转录调控作用,并影响let-7a的表达。结论:lncRNA RSU1P2可以促进宫颈癌细胞的恶性表型,并通过与let-7a的靶基因IGF1R、MYCN、EphA4及C14orf28竞争性结合let-7a,作为竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)发挥作用。转录因子 MYCN 与RSU1P2形成正反馈环路,进而增强其癌基因的功能。