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凋亡信号传导异常是肿瘤产生化疗耐药的重要原因之一,而肺癌耐药细胞在凋亡信号传导通路的前线粒体水平存在明显缺陷,若直接以线粒体为目标,则有助于避开这些缺陷。线粒体DNA缺乏组蛋白保护且自身修复能力弱,是理想的药物作用靶点,将存在于细胞核内的N-甲基化嘌呤-DNA-糖基化酶(MPG)导入线粒体内,可切割线粒体DNA导致其断裂。缺氧是影响肺癌等实体肿瘤化疗耐受性的另一重要原因,同时也是实体肿瘤区别于正常组织的显著特征,利用在缺氧条件下特异性存在的转录因子-缺氧诱导因子(HIF)来增强目的基因MPG的表达,有助于提高治疗方案的靶向性。目的1.研究缺氧(3%O2)对肺腺癌多药耐药细胞耐药性的影响,并探讨其可能的调节机制。2.建立缺氧增强型线粒体靶向MPG表达体系,观察其对缺氧条件下肺腺癌多药耐药细胞生物学特性的影响,并探讨其作用机制。方法1.观察缺氧对耐药细胞株A549/CDDP耐药性的影响MTT法于常氧和缺氧下分别观察不同作用机制化疗药物的半数抑制浓度(IC50),并通过Annexin-Ⅴ-PI标记流式细胞术检测不同药物作用下A549/CDDP细胞的凋亡/坏死情况,进一步确认MTT法结果。2.探讨缺氧影响A549/CDDP细胞耐药性的机制以MTT法、PI标记流式细胞术、增殖核抗原(PCNA)免疫细胞化学染色观察缺氧对A549/CDDP细胞增殖能力的影响;以TUNEL法,Annexin-Ⅴ-PI标记流式细胞术观察缺氧对其凋亡/坏死的影响;罗丹明123 (Rh123)外排实验评估缺氧对P-gp介导的药物排出能力的影响;流式细胞仪及荧光显微镜观察缺氧对细胞内活性氧簇(ROS)生成的影响;自发光荧光仪检测细胞内ATP浓度;测量细胞培养基内pH,观察缺氧对其生长环境酸碱度的影响;流式细胞术检测不同pH下细胞内多柔比星浓度。3.建立缺氧增强型线粒体靶向MPG表达体系