目的检验芳维A酸乙酯（Arotinoid Ethylester，AE）对小鼠银屑病样模型在抗表皮细胞增殖、诱导异常增生的表皮细胞凋亡、促进表皮颗粒层细胞增生、抑制炎症、抑制中性粒细胞（PMN）趋化性等方面的药效学作用。材料与方法一、实验动物及分组：1、实验动物：清洁级成年BALB／c小鼠，雌雄各半，体重20±5g。购自中国医学科学院实验动物研究中心。2、分组：小鼠随机分组如下：2．1组：即银屑病样增生模型治疗组：230只小鼠随机分为7个试验剂量组，每组30-40只，每组又分3-4个时点（0W、2W、4W、6W）组。并设立正常对照组（未建模型未用药组）及模型对照组（建立模型后未用药组），每组10只，雌雄各半。模型建立后，按照不同试验剂量组别分别给予不同药物灌胃给药。分别在模型建立当日（0W）、给药后2W、4W、6W各时点分别取出各试验剂量组（每组10只）小鼠，断颈处死，取背部皮肤标本分成三份，分别用OCT包埋存放于-20℃冰箱、4％福尔马林固定、-80℃冰箱储存备用。2．2组：即小鼠耳部炎症模型治疗组：70只小鼠随机分为7个试验剂量组「正常对照组，模型对照组，溶剂对照组（服植物油组），阳性对照组（阿维A酸组），低剂量AE试验组，中剂量AE试验组，高剂量AE试验组)」，每组10只，雌雄各半。将50μl的巴豆油滴于各组小鼠右耳（正常对照组除外），30分钟后灌胃给药。左耳作空白对照。2小时后将小鼠断颈处死，沿耳廓基线剪下左右两耳，用直径6mm的打孔器分别在左右耳同一部位打下圆耳片，电子秤称重。2．3组：即诱导小鼠尾部鳞片表皮颗粒层细胞增生组：72只小鼠分二组，每组分别由36只小鼠随机分6小组，每小组6只，雌雄各半。所有小鼠每日用棉签分别蘸取不同药物涂抹鼠尾10和14次各为一疗程。分别处死小鼠36只，在距鼠尾基底部以下2cm处切断尾巴。切下皮肤，立即在70％酒精中固定，石蜡包埋，作组织学检查。二、小鼠银屑病样模型的建立及检测：1、银屑病样增生模型于试验前一天用脱毛剂脱去小鼠背部毛。分别于第1天和和第8天于背部脱毛区（2.5cm×2cm）涂0.75％DMBA（150μg／200μl丙酮液）；第15天起在相同部位涂0.25％巴豆油（50μg／200μl丙酮液），每周2次，共4周。分别于建模当天（0W）、给药2W、4W、6W后引颈处死各组小鼠，取材备用。2、对银屑病样增生病变的治疗作用的检测：2．1皮肤的IL-8RⅡ（CXCR₂）的测定（免疫组化法）；2．2皮肤的TNF-α的p75受体的测定（免疫组化法）；2．3皮肤的表皮细胞层数检测（H.E.染色）；2．4表皮PCNA的测定（免疫组化法）；2．5皮肤的Bax的测定（免疫组化法）。三、对小鼠尾部鳞片颗粒细胞增生诱导的检测：在光学显微镜下观察每个小鼠的尾部鳞片。凡鳞片表皮有连续成行的颗粒细胞者，称为有颗粒层形成的鳞片。计数每10个鳞片中有颗粒层形成的鳞片数，对各组数据进行比较。四、对小鼠耳部炎症模型作用的检测：1、耳重量的检测：将巴豆油造成小鼠耳炎症模型后予不同药物灌胃2小时后，用直径6mm的打孔器取下的病侧（右耳）与正常对照侧（左耳）耳壳，立即用电子天平称重，计算二者重量之差，作为肿胀度，比较各试验剂量组间肿胀度差异的显著性，并计算炎症抑制率。2、检测指标：2．1肿胀度：左右耳重量之差。2．2炎症抑制率：（1-实验组耳肿胀度／对照组肿胀度）×1了0％。五、统计学分析及处理：采用SPSS13.0统计软件，所有数据均以（?）+SD表示，计量资料采用单因素方差分析（One Way ANOVA），计数资料采用秩和检验。结果一、对小鼠银屑病样增生病变的治疗作用：1、对小鼠银屑病样增生表皮IL-8RⅡ（CXCR₂）的检测：（1）模型对照组IL-8RⅡ的表达水平明显高于正常对照组，且表达量随巴豆油的不断刺激而增加；不同时间点的表达分别为：0（0W）、23±13.64（2W）、46±13.56（4W）、16.11±3.93（6w）。（巴豆油4W以后因刺激大而逐渐减量）。（2）高剂量AE组IL-8RⅡ的表达最低，且随给药时间延长而呈递减趋势，即有一定的时间依赖性；高剂量AE组IL-8RⅡ的表达在每个时间点均比中、低剂量AE组低，尤其在给药后期（6W）与中剂量AE组差异显著（P＜0.05），呈现一定的剂效性。（3）阳性对照（阿维A酸）组在给药初期（2W、4W）表达IL-8RⅡ明显少于三个AE组（P＜0.05），但随给药时间的延长出现了高表达，与三个AE组比较差异显著（6W与低、高剂量AE组比较P=0.017／0.038）。2、对小鼠银屑病样增生表皮TNFR-p75的检测：（1）模型对照组TNFR-p75的表达水平明显高于正常对照组，且表达量随巴豆油的不断刺激而增加；不同时点的表达分别为：0（0W）、20.5±8.5（2W）、27.14±11.61（4W）、12.78±6.29（6W）。（2）给药早期，三个AE组及阿维A酸组均明显抑制TNFR-p75表达（与模型对照组比较均P＜0.01）。三个AE组在各时点都比阿维A酸组表达量少，有统计学差异：早期（2W）阿维A酸组与高剂量AE组差异明显（P=0.006），后期（6W）表达明显升高，甚至高于模型对照组，与低剂量AE组差异显著（P=0.005）。（3）三个AE组表现出：早期高剂量组表达明显比低剂量组少（P=0.03），但随给药时间延长，晚期中、高剂量组表达呈增高趋势；低剂量组则无明显增高。3、对小鼠银屑病样增生表皮PCNA的检测：（1）三个AE组抑制表皮PCNA的表达作用随剂量增大而呈递减趋势，低剂量组随时间延长抑制作用加强。在6W时三个AE组PCNA的表达分别为：53.2±21.04（高剂量AE组）、46.0±7.38（中剂量AE组）、27.75±4.94（低剂量AE组）；只有低剂量AE组与模型对照组差异显著（P＜0.01）。（2）阿维A酸组在不同时间点均能抑制表皮PCNA的表达，但在给药后期（6W）抑制作用明显弱于低剂量AE组。在6W时PCNA的表达分别为：35.0±9.48（阳性对照组）、27.75±4.94（低剂量AE组）。4、对小鼠银屑病样增生表皮Bax的检测：（1）三个AE组均能抑制Bax的表达，且作用随剂量升高而有加强趋势，差异有统计学意义。中、高剂量组呈现一定的时间依赖性，Bax的表达随AE给药时间延长呈增强趋势。（2）阿维A酸组在三个时间点表达Bax均弱于三个AE组，与高剂量AE组差异更显著（P＜0.01）。5、对小鼠银屑病样增生表皮细胞层数的检测：（1）三个AE组表现为先促进异常增生的表皮进一步增生，后抑制增生；且随给药时间的延长抑制增生作用加强，与4W时比较，三个AE组在6W时的表皮层数差异均非常显著（均为P＜0.01），呈现明显的时效性；同时又有一定的剂效性：剂量越小，抑制作用越强。表皮层数分别为：低剂量组：2.0±0（2W）、2.22±0.42（4W）、1.5±0.5（6W）；中剂量组：2.44±0.50（2W）、3.0±0（4W）、2.2±0.6（6W）；高剂量组：2.86±0.35（2W）、3.0±0（4W）、2.2±0.4（6W）。。（2）阿维A酸组开始即表现出较好的抑制表皮增生作用，但没有明显随给药时间延长而抑制作用加强，显示其时效性不如AE。表皮层数分别为：1.3±0.46（2W）、2.0±0（4W）、1.6±0.49（6W）。二、对小鼠耳巴豆油致炎模型的治疗作用：1、大体观察：外涂巴豆油2小时后，只有高剂量AE组无明显炎症表现，其余（除正常对照组）均出现不同程度的耳部充血、红肿等炎症表现；阿维A酸组相对较轻。提示阿维A酸及高剂量AE均有炎症抑制作用；但弱于高剂量AE。2、鼠耳肿胀度及炎症抑制率的比较：中、低剂量AE组及阳性对照组与正常对照组比较，鼠耳肿胀度均增高，差异有统计学意义，给药各组只有高剂量AE组与正常对照组无差异（P＞0.05）；给药各组中只有高剂量AE组与模型组差异显著（P＜0.05）；阿维A酸组与模型对照组差异不显著（P＞0.05）；高剂量比中、低剂量AE组差异均明显（均P＜0.05）。三、对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层细胞增生的作用：1、给药10天，只有高剂量AE组及阳性对照组显示出明显的诱导颗粒层细胞增生作用，前者略强于后者。高剂量AE组、阿维A酸组产生有颗粒层形成的鳞片数分别为43.3±1.25、33.3±1.69，与正常对照组及溶剂对照组比较均差异显著，分别为P＜0.01及P＜0.05。2、给药14天，中、高剂量组及阿维A酸组明显诱导颗粒层细胞增生，高剂量AE组、中剂量AE组、阿维A酸组产生有颗粒层形成的鳞片数分别为53.33±1.97、31.67±0.69、36.67±0.75，与正常对照组及溶剂对照组比较均差异显著（均P＜0.01）；而且高剂量组作用最强，明显强于中剂量AE组及阿维A酸组（P＜0.05）。结论1、DMBA／巴豆油较成功地诱发了小鼠表皮银屑病样增生模型，其所造成的增殖病变中，KC过度增生、皮肤炎症改变以及某些生化、细胞因子和免疫学的改变，与银屑病的改变相似。2、三个AE组均有抗炎、抗白细胞趋化性作用，但用药早期，较大剂量作用明显，长期用药则高剂量出现炎症加重反应；阿维A酸组在用药早期作用明显，但长期用药出现明显的炎症加重反应。3、AE抑制表皮细胞增生的药效既具有时间依赖性：用药时间越长，抑制增生的作用越明显，即有时效性的特点；又有剂量依赖性，小剂量组的抑制表皮增生作用更为明显。阿维A酸开始即表现出较明显的抑制表皮增生作用，但长期用药的时效性不如低剂量AE。4、AE及阿维A酸对异常增殖的表皮细胞均有诱导凋亡作用，AE的这种诱导凋亡作用，既有一定的剂效性，又有一定的时效性：剂量越高，给药时间越长（主要是中、高剂量组），作用越明显；阿维A酸作用强度及时效性均弱于AE，尤其与高剂量AE组差异显著。5、AE及阿维A酸外用均可诱导小鼠尾部皮肤鳞片颗粒层细胞增生，AE诱导增生作用既有剂效性，又有时效性：剂量越高，给药时间越长，作用越明显；阿维A酸作用也较强，但其强度及时效性均明显不如高剂量AE。