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目的:比较研究肝脏线粒体、骨骼肌线粒体和心肌线粒体三种外源线粒体对原代神经元存活及轴突再生的影响;评估三种外源线粒体中对神经元轴突再生影响;观察肝脏线粒体对损伤神经元轴突再生的影响及神经元功能的影响;评估肝脏线粒体对损伤神经元轴突再生过程中脂质代谢的影响。方法:第一部分首先原代培养孕14-17 d的C57BL/6胎鼠大脑皮质神经元。培养7 d后进行细胞鉴定,分析培养细胞种类及纯度。然后采用差速离心法提取C57BL/6小鼠肝脏线粒体、骨骼肌线粒体和心肌线粒体。在培养7 d后的神经元进行划痕损伤实验,然后分别向各组神经元的培养上清中加入同等量的肝脏线粒体、骨骼肌线粒体、心肌线粒体。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP原位切口末端标记法（Td T-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL）、活细胞PI标记观察细胞坏死。采用免疫蛋白印迹和免疫荧光染色检测生长相关蛋白（Growth associated Protein-43,GAP-43）的表达。采用分光光度计测量C57BL/6小鼠肝脏线粒体、骨骼肌线粒体和心肌线粒体中ATP水平。第二部分原代培养孕14-17 d的C57BL/6胎鼠大脑皮质神经元。培养7 d后进行划痕损伤实验,采用差速离心法提取C57BL/6小鼠肝脏线粒体然后分别向各组神经元的培养上清中加入同等量的肝脏线粒体。采用Western Blot和免疫细胞化学染色检测GAP-43的表达。采用分光光度计测量线粒体体复合体酶和ATP水平。同时采用全细胞膜片钳技术记录测量肝脏线粒体对划伤后神经元突触活动的影响。第三部分同上原代培养孕14-17 d的C57BL/6胎鼠大脑皮质神经元。培养7 d后进行划痕损伤实验,采用差速离心法提取C57BL/6小鼠肝脏线粒体然后分别向各组神经元的培养上清中加入同等量的肝脏线粒体。采用Western Blot和免疫细胞化学染色检测脂滴的标记蛋白（磷脂酸磷酸水解酶1,Li Pin-1）及GAP-43的表达。结果第一部分:原代细胞神经元的鉴定表明神经元纯度高达98%以上。差速离心法提取C57BL/6小鼠的肝脏组织的线粒体,计数显示,100 mg肝脏组织可提取大约有4x10~8个线粒体,100mg心肌组织可提取大约有2x10~8个线粒体,100 mg骨骼肌组织可提取大约有1x10~8个线粒体,TUNEL染色、PI染色显示:三种线粒体处理后,肝脏线粒体处理组的细胞死亡最少,提示肝脏线粒体的促神经元存活能力最强。GAP-43表达显示:三种线粒体处理组中,肝脏线粒体处理组GAP-43的表达水平最高。进一步分析发现:相同数量的肝脏线粒体产生更高水平的ATP。并且,肝脏线粒体可显著促进神经元线粒体呼吸链复合体酶的活性。第二部分:原代培养神经元7 d之后,做划痕实验。我们对肝脏线粒体进行了时间梯度（6 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h）和浓度梯度（4×10~8/ml、4×10~7/ml、4×10~6/ml、4×10~5/ml）效应的探索。将各浓度的肝脏线粒体加到神经元培养上清,洗脱后,6 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h小时后,进行GAP-43的免疫荧光染色。结果显示:各组中都有轴突长入损伤区。生长相关蛋白GAP-43的免疫荧光定量分析,4×10~6/ml组的轴突长入损伤区的数量和长度最高。我们进而观察了给予肝脏线粒体后,神经元中线粒体呼吸链复合体酶的活性。结果表明:与对照组相比,肝脏线粒体处理显著地提升了损伤神经元复合体II、复合体Ⅲ、复合体Ⅴ的活性。同时体外原代神经元培养后所进行的全细胞膜片钳实验结果中有线粒体处理组相比与无线粒体处理组的突触后膜电流在频率和振幅有明显升高。表明了线粒体处理组显著上调了神经元的兴奋性突触后电流（EPSC）。第三部分:原代培养的神经元7 d之后做划痕实验,将4×10~6/ml肝脏线粒体加到神经元培养上清后洗脱48 h后,进行GAP-43的免疫荧光染色。结果显示:与划伤对照组中相比,线粒体处理组有大量都有轴突长入损伤区都有轴突长入损伤区,并伴脂滴生成增多。生长相关蛋白GAP-43和脂滴检测（Li Pin-1）的免疫荧光定量分析显示,轴突长入损伤区最显著的地方脂滴生成也最显著。同时Western-blot结果表明:肝脏线粒体可显著上调GAP-43的表达和脂滴生成。结论:在第一部分中我们采用原代神经元的划伤模型,通过活细胞PI染色,TUNEL染色,生长相关蛋白GAP-43的免疫荧光染色和Western Blot,比较观察了三种外源线粒体（肝脏线粒体、心肌线粒体、骨骼肌线粒体）对神经元存活和轴突再生的影响,发现肝脏来源的线粒体具有更强的促神经元存活和促轴突再生能力。在第二部分研究中,我们分析了不同浓度梯度和不同处理时间的肝脏线粒体对轴突再生的影响。我们的结果显示在4×10~6/ml的线粒体处理48 h,被划伤的新生轴突数量和长度均最优。第三部分实验中,我们探索了肝脏线粒体处理后,损伤神经元脂质合成的变化。结果显示,肝脏线粒体可显著促进神经元胞浆和轴突中脂滴的生成。