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疏棉状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）耐热脂肪酶（tll）是重要的工业酶，在食品、制药、化工等领域有广泛的用途。该酶的传统生产方法是通过内源分泌得到，产物量少、质量参差不齐、无法产业化等限制了其应用。丝状真菌具有高效分泌表达外源蛋白的能力，因此成为优良的蛋白表达宿主和重要的工业酶制剂生产菌。其中，由于黑曲霉在工业生产中的重要性及其作为外源基因表达宿主所具有的高产量、安全性好、高效的翻译后修饰功能和高效的分泌表达系统等优越性，使得黑曲霉成为外源基因表达的良好宿主。本研究以无孢黑曲霉SH-2为宿主，首先采用农杆菌转化和原生质体转化两种方案，对无孢黑曲霉SH-2进行转化研究。同时，用无孢黑曲霉SH-2重组表达疏棉状嗜热丝孢菌耐热脂肪酶，并对所得耐热脂肪酶转化子的发酵表达和重组耐热脂肪酶的生物学特性进行研究。结果表明，农杆菌转化和原生质体转化都可以在无孢黑曲霉SH-2中获得成功，得到的转化子脂肪酶活力分别为：33U/mL和73U/mL；此外，重组耐热脂肪酶的生物学特性研究表明在pH为8.0，温度为60℃时，重组脂肪酶的活力达到最大。构建糖化酶、淀粉酶以及蛋白酶转录因子的RNAi共干扰表达载体，并采用原生质体转化对筛选得到的原生质体耐热脂肪酶转化子进行再转化，对筛选到转化子的研究表明RNA干扰后无孢黑曲霉的糖化酶会被抑制同时脂肪酶活力增加至97U/mL。研究进一步对无孢黑曲霉SH-2进行片段共转化的研究，片段共转化可以在一次转化中同时实现耐热脂肪酶的表达和RNA干扰两个目的，得到的转化子酶活力为82U/mL。在此基础上，对共转化得到的耐热脂肪酶amdS-RNAi转化子进行2L发酵罐发酵小试初步研究，发酵所得脂肪酶活力为187U/mL，为之后的中试和大规模发酵提供理论基础。