新疆酿酒葡萄中产白藜芦醇内生菌的筛选及其发酵工艺研究

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植物内生菌是一个具有普遍存在性的庞大的特殊微生物类群,能够产生丰富的生物活性物质,其中绝大部分还能产生与寄主植物相同或相似的次级代谢产物。这为发现新的先导化合物、开发新药及保护濒危植物提供了重要的开发和利用途径。因此成为了研究热点。本文采用组织块分离法对新疆酿酒葡萄的根、茎、叶中的内生菌进行分离、纯化,从中筛选能够产白藜芦醇的高效菌株,确定其分类学地位,通过响应面试验,优化其发酵产白藜芦醇的工艺,主要结果如下:1酿酒葡萄中内生菌的分离、纯化:在春、夏、秋三个不同季节,分别采集酿酒葡萄的根、茎、叶等组织器官,采用组织块分离法,从中分离内生细菌、放线菌和真菌,共分离得到内生菌73株,其中细菌23株、放线菌14株、霉菌24株、酵母菌12株。其在不同季节中的分布规律为:春季(30.14%)=夏季(30.14%)<秋季(39.73%);在不同组织器官中的分布规律为:果实(12.33%)<叶部(20.55%)<茎部(32.88%)<根部(34.25%)。2白藜芦醇产生菌的筛选与鉴定:将分离到的38株内生真菌接种到PDA液体培养基中进行发酵培养,经乙酸乙酯萃取后利用化学显色反应的特征对其进行初筛,再利用薄层层析、紫外波长扫描、高效液相检测进行复筛,最终得到1株产白藜芦醇的内生菌C2J6,并研究了其遗传稳定性。通过形态、生理生化及26SrDNA-ITS分子生物学技术进行鉴定,确定该菌株为黑曲霉(Aspergillusniger),构建了系统发育树。3C2J6产白藜芦醇工艺条件的优化:对影响目标菌株产白藜芦醇的培养基和发酵条件进行研究,通过单因素实验,确定了影响白藜芦醇产量的因素和水平:培养时间,培养温度,pH,转速,接种量,装液量,碳源,氮源,微量元素;在此基础上进行了部分因子实验,确定影响发酵条件的显著性因素为蔗糖、pH、转速、尿素、硫酸锰;然后采用中心组合实验确定了优化的发酵工艺条件:蔗糖2.10%,pH4.94,尿素1.36%,硫酸锰0.00847%,此时白藜芦醇产量可达1.965g·L-1
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