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凡纳滨对虾是全球最重要的经济养殖虾品种之一,在世界范围内大量养殖。但其病害也日益严重,对虾病毒病暴发流行给世界对虾养殖业造成巨大经济损失,对海洋资源的可持续发展造成巨大威胁,因此对虾病毒病的研究已成为当前世界虾病研究领域的热点之一。桃拉综合征是最主要的一种影响凡纳滨对虾产量的病毒病,其致死率高达90%以上。桃拉综合征最初仅在南美洲的厄瓜多尔发现,但通过运输感染了病毒的仔虾和亲虾将病毒扩散到美洲,并进一步扩散到全世界。目前,桃拉病毒的诊断方法有组织病理学方法、cDNA探针的原位杂交法、RT-PCR法,但是这些方法均不符合口岸部门快速检疫的要求,因此急需一种快速准确的检疫方法。本研究根据GenBank中桃拉病毒的全基因组序列,分别设计扩增该病毒主要结构蛋白基因vp1、vp2、vp3的相应引物,以发病的凡纳滨对虾中提取的总RNA为模板,利用RT-PCR技术对目的基因进行了扩增,分别获得分子量为1164bp、849bp和507bp的基因片段,片段大小与预期一致。将目的片段与pTA2载体连接,导入大肠杆菌DH5α,获得阳性重组子pTA-vp1、pTA-vp2、pTA-vp3。目的片段测序结果的Blast分析表明已成功获得相关蛋白的基因片段。将此阳性重组子和pET-28a载体分别进行双酶切,构建重组表达载体pET-VP1、pET-VP2和pET-VP3,重组子经酶切和测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测。SDS-PAGE电泳的结果表明,在37℃下,0.5mmol/dm~3的IPTG诱导表达的重组蛋白均以包涵体的形式存在,重组蛋白VP1、VP2、VP3的大小分别为48KDa、36KDa和24KDa。将重组蛋白复性后用镍柱纯化,将纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,Western免疫印迹反应结果表明获得的抗体可与重组蛋白发生特异性反应,Dot-ELISA结果表明获得的抗体可与病虾的病灶发生特异性反应。本研究的结果为研制桃拉病毒快速检测试剂盒奠定了基础。