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电离辐射可以诱导一系列生物学事件的发生,对电离辐射敏感的基因、蛋白可能作为电离辐射生物分子标志物,用于估算机体受照剂量和放射医学辐照防护。细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂1A(CDKN1A)基因对细胞周期的调控有着重要的作用;脂肪酸结合蛋白4(FABP4)以及激素敏感性脂肪酶(HSL)与脂代谢紊乱、炎症反应、动脉粥样硬化等密切相关。已有报道结合本课题预实验表明,上述基因或蛋白属于电离辐射敏感性分子,但这些基因或蛋白的表达与电离辐射的剂量、所在细胞的培养时间之间有着怎样的关系,至今不很明确,这些正是本文所要探讨的内容。目的:探讨各剂量γ射线照射对人淋巴母细胞在不同培养时间内CDKN1A基因mRNA、FABP4和HSL蛋白表达的影响。方法:1.用不同剂量(0 Gy、0.2 Gy、1 Gy、3 Gy、5 Gy、10 Gy)的60Coγ射线照射正常人淋巴母细胞(AHH-1细胞),在不同维持存活培养时间(0 h、4 h、24 h、48 h、72 h、96 h)内收集细胞,抽提总RNA,用Real-time PCR检测细胞中CDKN1A基因mRNA表达水平,观察其随辐照剂量和培养时间的变化。2.用不同低剂量(0 Gy、0.1 Gy、0.5 Gy、1 Gy)的60Coγ射线照射正常人淋巴母细胞(AHH-1),在不同维持存活培养时间(0 h、24 h、48 h、72 h)内收集细胞,抽提总RNA和总蛋白,用Real-time PCR检测细胞中FABP4基因mRNA表达水平,用Western Blot检测细胞中FABP4蛋白和HSL蛋白的表达水平。结果:1. AHH-1细胞中CDKN1A基因mRNA的表达水平随辐照剂量的加大而增加,在0 Gy10 Gy之间具有一定剂量依赖性关系(P<0.05),辐照后培养24 h时基因表达达到峰值,以后呈现下降趋势。2.不同剂量照射后细胞培养24 h、48 h,与对照0 Gy组相比,淋巴母细胞株FABP4 mRNA表达水平随剂量变化呈现波动变化,0.1 Gy组下调,0.5 Gy组和1 Gy组上调;照射后培养72 h,FABP4 mRNA表达在不同剂量点均上调,其中,0.1 Gy和1 Gy时显著上调;γ射线照射后培养72 h,各剂量组淋巴母细胞株FABP4基因表达变化倍数比其他时间点变化倍数大。3.淋巴母细胞随照射剂量的增加在照射后培养0 h时、24 h时和48 h时,FABP4蛋白相对表达量均没有明显差异变化;照射后培养72 h时,FABP4蛋白在1 Gy相对0 Gy表达变化在2倍以上(上调)。4.淋巴母细胞随照射剂量的增加在照射后培养0 h时和24 h时,HSL蛋白相对表达水平没有明显差异;照射后培养48 h时,HSL蛋白0.5 Gy时相对0 Gy的表达变化在2倍以上(上调),其余剂量组与未照射组相比没有明显差异;照射后培养72 h时,HSL蛋白1 Gy时相对0 Gy的表达变化在2倍以上(下调),其余剂量组与未照射组相比没有明显差异。5.不同剂量及不同细胞培养时间点的FABP4、HSL蛋白的相对表达量变化,与未照射0 Gy组相比,在照射后培养24 h时、48 h时和72 h时,随照射剂量的增加和培养时间的延长,FABP4蛋白表达水平趋势与HSL蛋白表达的趋势相反。结论:1.γ射线照射人AHH-1细胞,导致CDKN1A基因转录水平在0 Gy10 Gy之间具有一定剂量依赖性关系,在辐照后培养24 h内随辐射剂量增加而升高。该基因可能适用于电离辐射剂量的估算。2.不同低剂量γ射线照射人AHH-1细胞后培养72 h,FABP4转录水平及蛋白水平的表达在不同剂量点明显上调。3.不同低剂量γ射线照射人AHH-1细胞,在照射后培养24 h至72 h时,随照射剂量的增加和培养时间的延长,FABP4蛋白表达水平趋势与HSL蛋白表达的趋势相反。4.一次性低剂量γ射线辐照可能对淋巴母细胞脂代谢在分子水平上有一定影响。