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目的:近年来大量研究表明,微小R NA(micro RNA,mi RNA)参与调控包括类风湿关节炎(r heumatoid arthritis,RA)在内的多种自身免疫性疾病的病理进程。本课题组前期研究发现在R A患者血浆中存在9种差异性表达的mi RNA,其中mi R-342-3p、mi R-181d、mi R-122-3p、mi R-9-5p在胶原诱导的关节炎(c ollagen-induced arthritis,CIA)小鼠血浆中也存在差异性表达;且RA及CIA小鼠模型中C D4~+T细胞和髓样抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)均呈活化增殖状态并在RA的发病机制中发挥重要作用。因此本研究旨在探讨小鼠脾脏C D4~+T细胞与骨髓MDSC在体外活化扩增状态下mi R-342-3p、mi R-181d、mi R-122-3p、mi R-9-5p的表达情况,以便于进一步了解CD4~+T细胞与M DSC的活化扩增机制,并为深入探讨mi RNA在免疫应答、免疫调节及以RA为代表的自身免疫性疾病中的作用提供新的思路。方法:(1)使用牛Ⅱ型胶原和弗氏佐剂诱导CIA小鼠模型,于造模第45天运用流式细胞术检测C IA小鼠脾脏CD4~+T细胞的比例以及CIA小鼠骨髓、脾脏、外周血M DSC的比例。(2)用CD3/CD28免疫磁珠法刺激培养正常小鼠脾脏CD4~+T细胞24h,使用流式细胞术检测刺激培养0h和24h后CD4~+CD69+的细胞比例。(3)采用浓度均为10ng/ml的GM-CSF和IL-6联合刺激培养正常小鼠骨髓MDSC 4天,使用流式细胞术检测未刺激组与刺激组CD11b+Gr-1+MDSC的比例,并利用实时荧光定量P CR技术检测MDSC的产物Arg-1和i NOS的表达水平。(4)运用实时荧光定量PCR技术检测CD3/CD28免疫磁珠刺激培养脾脏CD4~+T细胞0h、6h、12h、24h四个不同时间点mi R-342-3p、mi R-181d、mi R-122-3p、mi R-9-5p的表达水平,以及GM-CSF和IL-6联合刺激培养骨髓M DSC 4天后,未刺激组与刺激组中这四种mi RNA的表达水平。结果:(1)造模第45天时,CIA小鼠脾脏CD4~+T细胞的比例明显高于正常小鼠(P<0.001),CIA小鼠骨髓、脾脏、外周血MDSC的比例与正常小鼠相比也明显升高(P均<0.001)。(2)用CD3/CD28免疫磁珠法刺激培养正常小鼠脾脏CD4~+T细胞24h后CD4~+CD69+的细胞比例明显高于培养0h(P<0.01)。(3)mi R-342-3p和mi R-181d在刺激培养脾脏CD4~+T细胞6h、12h、24h后的表达水平均明显低于0h(P<0.05),而6h、12h、24h这三组间的差异无统计学意义(P>0.05),mi R-9-5p和mi R-122-3p的表达各组间也未见明显差异(P>0.05)。(4)与未刺激组相比,使用GM-CSF和IL-6联合刺激培养小鼠骨髓MDSC 4天后C D11b+Gr-1+MDSC的比例显著升高(P<0.001),Arg-1的m RNA水平也明显升高(P<0.01),i NOS的表达水平虽呈升高趋势但差异无统计学意义(P>0.05)。(5)与未刺激组相比,使用GM-CSF和IL-6联合刺激培养小鼠骨髓MDSC 4天后m i R-342-3p的表达水平显著下降(P<0.001),mi R-9-5p的表达水平显著升高(P<0.05),mi R-181d和mi R-122-3p的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)CD4~+T细胞在CIA小鼠脾脏中活化增殖,MDSC在CIA小鼠骨髓、脾脏、外周血中也明显活化扩增,提示C D4~+T细胞和MDSC很可能在CIA小鼠的发病机制中发挥重要作用。(2)CD3/CD28免疫磁珠法在体外能够诱导小鼠脾脏CD4~+T细胞活化,GM-CSF和IL-6联合刺激法也能够诱导小鼠骨髓MDSC活化扩增。(3)体外诱导小鼠CD4~+T细胞活化状态下mi R-342-3p和mi R-181d的表达发生改变,体外诱导小鼠M DSC活化扩增后mi R-342-3p和mi R-9-5p的表达亦有明显变化,提示这些m i RNA尤其是mi R-342-3p,可能参与CD4~+T细胞和M DSC的活化进程。