论文部分内容阅读
生物防腐剂在食品的防腐与保鲜中起着重要作用,而乳酸菌细菌素则是被广泛研究的一类生物防腐剂。乳酸菌细菌素是乳酸菌在代谢过程中产生并分泌到胞外中的一类多肽或蛋白类物质,具有抑菌活性,且还由于它具有无毒、无残留、无抗药性、耐酸、耐高温、高效等多种特点,而且可以在人体内进行降解,目前已经发展为天然防腐剂研发的热点。构建基因组文库不仅可以使生物的遗传信息以稳定的形式贮存起来,并且也是分离克隆目的基因的重要方法。本文旨在利用构建细菌基因组文库的方法,探索本试验室从泡菜中分离出来的Lactobacillus rhamnosus LS8菌株中存在的可能的细菌素编码基因,以期从基因层面推出编码该细菌素的氨基酸序列。通过试验我们得到以下几点结论:1.通过吖啶橙与高温交替传代培养来消除质粒,试验结果表明传代至24代时,质粒消失,至29代菌株,质粒完全消除。本试验又进一步对比了29代菌株和1代菌株的抑菌效果,结果表明抑菌效果并没有显著变化,从而表明该细菌素的编码基因位于基因组上,而不是由质粒编码的。2.提取Lactobacillus rhamnosus LS8的基因组DNA,采用同尾酶Sau3A1部分酶切基因组DNA,回收大小范围在250bp~1000bp的片段,再使用Bam H1完全酶切载体pBluescript SK+并进行去磷酸化处理,进而采用T4 DNA连接酶将全部回收片段与已经酶切并去磷酸化后的载体进行连接,采用CaCl2处理法转化大肠杆菌感受态细胞(E.coli DH 5α)。通过蓝白斑和氨苄抗性筛选,最终得到阳性克隆1480个,并采用菌液PCR对克隆进行了检测。3.将测序并拼接后所得的101条序列在NCBI上进行比对,发现了5个可能的细菌素编码基因序列,然后根据5段基因序列分别设计引物进行PCR扩增并再次进行测序,回收扩增产物并保藏。