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抗苗勒管激素(Anti-Müllerian hormone，AMH)是由两个72kDa的单体通过二硫键连接构成的二聚体糖蛋白。AMH/MIS属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族，该家族包括TGF-β、激活素-抑制素-卵泡抑素(ACT-INH-FST)系统和生长分化因子-9(GDF-9)等。这个家族所有的成员都是二聚体糖蛋白，都与调节组织生长与分化有关。现已证实转化生长因子-β(TGF-β)超家族/Smad信号转导通路是调控卵泡发育的重要途径。在卵巢组织中，抗苗勒管激素表达于卵泡的颗粒细胞。已知抗苗勒管激素参与哺乳动物卵泡发育，通过自/旁分泌调节颗粒细胞的增殖分化，为了研究抗苗勒管激素对小鼠卵巢颗粒细胞的调控作用，本课题针对小鼠基因序列设计干扰片段，构建了抗苗勒管激素RNAi干扰载体pSilencer4.1-CMV-AMH，干扰颗粒细胞中抗苗勒管激素的表达，分别在mRNA和蛋白水平检测抗苗勒管激素的表达情况，发现在干扰抗苗勒管激素后，颗粒细胞内发生如下变化: 1)通过Western blot检测构建的三个抗苗勒管激素RNAi干扰载体，三个载体都显著下调抗苗勒管激素的蛋白表达，其中干扰载体psh-AMH-2的干扰效果最好; 2)流式细胞仪检测小鼠颗粒细胞干扰抗苗勒管激素后的细胞周期，发现较多的细胞阻滞在G1期。调控细胞周期的p21在mRNA和蛋白水平表达都显著上调; 3)流式细胞仪检测小鼠颗粒细胞干扰抗苗勒管激素后的细胞凋亡，发现细胞早期凋亡和晚期凋亡都显著增加。通过Real time PCR和Western blot检测抑制凋亡的Bcl-2表达情况，发现Bcl-2的表达显著下调; 4)CCK-8法检测颗粒细胞的增殖，干扰抗苗勒管激素后颗粒细胞的增殖降低; 5)ELISA检测颗粒细胞分泌雌激素和抑制素B的浓度，抑制素B分泌显著降低，雌激素也显著降低; 6)通过Real time PCR检测干扰后颗粒细胞中TGF-β超家族的抑制素各亚基(INHA、INHBA和INHBB)、卵泡抑素(Fst)、抗苗勒管激素受体(AmhRⅡ)和生长分化因子-9(GDF-9)的表达量，其中GDF-9上调，其他5种繁殖相关基因全都显著下调。