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心肌肥大是高血压、肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension，PAH)和其它心血管疾病的常见并发症，是心肌重构的典型特征，可引起心力衰竭，最终导致死亡。右心肥大常见于PAH，肺血管重构和阻力增加是其重要原因；左心肥大常见于高血压等疾病。心肌肥大已成为心血管疾病发病率和死亡率升高的独立危险因素，引起人们的广泛关注。目前心肌肥大的发病机制尚未完全阐明，临床缺乏有效的治疗心肌肥大的药物，提示需要寻找其他新的致病机制。因此，深入研究其发病机制并寻找新的防治心肌肥大的分子靶标具有重要意义。microRNAs(miRNAs)是一段22~25个核苷酸的非编码单链RNA，它通过与下游靶基因的3’非编码区发生特异性结合，属转录后调节，参与细胞的生长。已有研究提示一些miRNAs在心肌肥大形成后表达异常，但miRNAs在心肌肥大形成过程中的表达变化规律及作用机制少见报道。有学者通过生物信息学的方法预测并报道了数种与心肌肥大发生相关的miRNAs，我们在此基础上检测了这些miRNAs在心肌肥大模型中的表达变化，结果筛选发现miR-135a-5p、miR-199a-5p分别在右心肥大和左心肥大中表达上调最为显著，预示其可能在心肌肥大形成中具有重要作用。为此，本研究拟在我们预实验工作的基础上，探讨了miR-135a-5p和miR-199a-5p分别在右心肥大和左心肥大发生发展中的作用和机制，旨在为深化对心肌肥大发病机制的认识和寻找新的有效分子靶标提供实验基础。方法：1. miR-135a-5p在PAH致大鼠右心肥大中的作用及初步机制的研究方法：1.1右心肥大模型制备及给药：雄性SD大鼠，一次性皮下注射野百合碱(MCT)(60mg/kg)，对照组注射等量的生理盐水，分别于1周、2周、3周、4周后取材。1.2密切观察大鼠的一般状况。4周时，检测大鼠mPAP、RVSP，测定大鼠右心肥大指数(RVHI)、右心质量指数(RVMI)和肺指数(LI)；大鼠肺组织及右心室组织进行HE染色，并在光镜下观察病理形态学变化；RT-qPCR方法检测大鼠肺组织miRNAs的表达，筛选表达水平显著的miRNAs。1.3分别在右心肥大造模1周、2周、3周、4周后用RT-qPCR方法检测大鼠肺组织中miR-135a-5p的表达。1.4培养原代肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)，并用3%O2制备PASMCs增殖模型；分别在造模6h、12h、18h、24h、48h时采用RT-qPCR方法检测PASMCs中的miR-135a-5p表达。1.5转染miR-135a-5p模拟物或抑制物至PASMCs中，用CCK-8检测细胞增殖、[3H]-亮氨酸掺入量、流式细胞术检测细胞周期、RT-qPCR方法检测细胞增殖核抗原(PCNA)mRNA表达，探讨miR-135a-5p对3%O2诱导PASMCs增殖的影响。2. miR-199a-5p在腹主动脉缩窄(TAC)致大鼠左心肥大中的作用及初步机制的研究方法：2.1左心肥大模型制备及给药：雄性SD大鼠，采用TAC致左心肥大模型；随机分为假手术组、模型组、氯沙坦组。氯沙坦组给予10mg/kg/d氯沙坦钾；假手术组与模型组给予等量生理盐水，连续4周。2.2实验过程中密切观察大鼠的一般状况。4周时，处死大鼠，测定大鼠心脏肥大指数(CMI)和左心肥大指数(LVMI)；大鼠左心室组织进行HE染色，在光镜下观察病理形态学变化；RT-qPCR方法检测大鼠左心室组织miR-199a-5p的表达。2.3体外培养原代SD乳鼠心肌细胞，并用AngⅡ制备心肌细胞肥大模型，AngⅡ刺激心肌细胞12h后采用RT-qPCR检测miR-199a-5p的表达。2.4制备AngⅡ致心肌细胞肥大模型，转染miR-199a-5p模拟物或者抑制物至心肌细胞中，[3H]-亮氨酸掺入法检测蛋白合成。结果：1. miR-135a-5p在PAH致大鼠右心肥大中的作用及初步机制的结果：1.1MCT模型组有40%大鼠死亡，其余存活MCT模型大鼠一般状况较对照组差，其体重明显降低(p<0.01)。4周时，大鼠mPAP、RVSP显著增高(p<0.01,p<0.01)；RVHI、RVMI、LI明显升高(p<0.01,p<0.01,p<0.01)；肺血管管腔狭窄、右心室心肌细胞肥大；miR-135a-5p、miR-211-5p、miR-204-5p、miR-224-5p、miR-93-5p、miR-17-5p表达水平均上调，其中miR-135a-5p表达上调最为显著。1.2在MCT诱导的PAH致大鼠右心肥大模型中，造模1周时，与对照组相比，miR-135a-5p表达明显降至对照组的27.53%(p<0.01)；2周时，其表达水平降至对照的34.5%；3周时，其表达水平降至对照组的53.5%，miR-135a-5p表达呈上升趋势；4周时，其表达水平为对照组的965%(p<0.01)。1.3在体外3%O2制备的PASMCs增殖模型中，RT-qPCR方法检测到miR-135a-5p表达在6h、12h、18h、24h、48h时无显著变化。1.4在3%O2制备的PASMCs增殖模型中，30nM miR-135a-5p模拟物能显著抑制3%O2诱导的PASMCs增殖(p<0.01)，10nM miR-135a-5p模拟物对3%O2诱导的PASMCs增殖无显著影响；10nM、30nM miR-135a-5p模拟物能显著抑制[3H]-亮氨酸掺入量增加(p<0.05，p<0.01)；30nM miR-135a-5p模拟物能显著抑制增殖指数的增加和PCNAmRNA表达水平的增加(p<0.01，p<0.01)；10、30nM miR-135a-5p抑制物对3%O2诱导的PASMCs增殖、[3H]-亮氨酸掺入量增加、增殖指数增加、PCNAmRNA表达水平增加无显著影响。2. miR-199a-5p在TAC致大鼠左心肥大中的作用及初步机制的结果：2.1假手术组、模型组、氯沙坦组的大鼠分别死亡3、3、4只，组间无显著差异。4周时，与对照组相比，模型组大鼠CMI和LVMI均明显增加(p<0.01,p<0.05)，HE染色观察左心室心肌细胞明显肥大，左心室心肌miR-199a-5p表达显著增加(p<0.01)；与模型组相比，AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦可显著抑制心肌肥大的同时显著降低miR-199a-5p的表达(p<0.05)。2.2在AngⅡ刺激乳鼠心肌细胞肥大的模型中，氯沙坦可显著抑制miR-199a-5p在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大中表达水平的升高(p<0.05)。2.3miR-199a-5p抑制物可显著抑制AngⅡ致心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入的增加(p<0.01)；miR-199a-5p模拟物可显著增加心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入(p<0.01)。结论：1.在PAH致右心肥大模型中，miR-135a-5p表达水平在1周时显著降低；2周、3周时miR-135a-5p表达水平有上升趋势，但仍低于对照组；4周时其表达显著升高；结合体外miR-135a-5p可抑制低氧诱导的PASMCs增殖的发现，提示miR-135a-5p可能是改善肺血管重构进而防治右心肥大的新靶标。2.miR-199a-5p在TAC致左心肥大的发生过程中表达升高，AngⅡ受体抑制剂氯沙坦在抑制AngⅡ活性、改善心肌肥大的同时显著降低miR-199a-5p表达水平；结合体外下调miR-199a-5p的表达能显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大的发现，表明miR-199a-5p可能是介导AngⅡ诱导心肌细胞肥大的重要分子机制之一。