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[目的]
RASSF1A基因是一种重要的肿瘤抑制基因,在人类许多实体肿瘤中,其启动子CpG岛区域常常会发生高甲基化而导致其转录沉默。5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)能使因甲基化而失活的肿瘤抑制基因重新激活,进而抑制肿瘤的生长。本实验通过观察5-Aza-CdR对体外培养的人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)和体内裸鼠移植瘤的生长抑制作用与影响,进一步探索RASSF1A基因是否在人低分化鼻咽癌的发生发展中起着重要作用。同时,探讨该药物的抗肿瘤效应,为临床治疗鼻咽癌提供新的作用靶点。
[方法]
1.利用MSP、RT-PCR和免疫细胞化学等方法检测CNE-2Z细胞RASSF1A基因的甲基化水平及转录表达情况。
2.建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,观察5-Aza-CdR处理组和对照组裸鼠体内肿瘤的生长、侵袭和转移等情况。
3.利用MSP、RT-PCR和免疫组织化学等方法进一步检测裸鼠移植瘤组织内RASSF1A基因的甲基化水平及转录表达情况。
[结果]
1.体外细胞培养实验:
对照组CNE-2Z细胞内RASSF1A基因启动子CpG岛区域呈高甲基化,用5-Aza-CdR处理CNE-2Z细胞后RASSF1A基因的高甲基化水平降低,RASSF1A基因蛋白表达增加。
2.裸鼠移植瘤实验
1)用药组平均瘤重为1.237±0.809g,比对照组平均瘤重2.512±1.566g明显降低(P<0.05)。
2)用药组侵袭转移率为15.00%;对照组侵袭转移率为15.38%。两组结果无明显差别。
3)对照组瘤组织的RASSF1A基因启动子CpG岛区域均存在高甲基化,应用5-Aza-CdR后,RASSF1A基因的高甲基化水平降低,RASSF1A基因蛋白表达水平增加。
[结论]
1.RASSF1A基因在体外CNE-2Z细胞内和CNE-2Z裸鼠移植瘤内并未完全失活,呈低水平表达。
2.去甲基化药物5-Aza-CdR可使RASSF1A蛋白表达水平增加,并明显抑制裸鼠移植瘤的生长,但不能降低移植瘤的侵袭转移率。
3.RASSF1A基因去甲基化对CNE-2Z裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,但不影响其侵袭转移。