内生解淀粉芽孢杆菌TB2液体发酵的研究

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采用单因素试验和正交试验对具有广谱拮抗作用的内生解淀粉芽孢杆菌TB2菌株的摇瓶发酵培养基和发酵条件进行了研究。结果表明,最佳培养基组份为:玉米淀粉1.0%、豆粉1.0%、(NH4)2SO4 0.5%、MgSO4·7H2O 0.1%、FeSO4·7H2O 0.03%、K2HPO4·3H2O 0.02%、KH2PO4 0.01%;培养条件为:pH值7.5(消前),温度35℃,接种量3%,装量50 mL / 250 mL三角瓶,摇床转速200 r·min-1,发酵周期22~26 h。优化条件下发酵水平达到8.52×1010 cfu·mL-1。以TB2为出发菌株,根据摇瓶发酵培养基及条件的优化结果、发酵相关参数的变化来对该菌株进行180 L和270 L发酵罐发酵工艺的探索。最终确定了TB2菌株最佳发酵条件:初始pH值为7.5,以3%接种量接种到发酵罐,45%装液量,容氧率为30%,温度30~33℃。发酵过程中通过测定pH值,菌体浓度,还原糖、氨基氮含量及芽孢形成率的变化,最佳放罐时间为32 h左右。优化条件下发酵水平达到3.0~6.5×1010 cfu·mL-1,芽孢形成率达到90%以上。发酵液对黄瓜枯萎病菌、香蕉炭疽病菌、番茄灰霉病菌、番茄叶霉病菌的拮抗试验结果表明,发酵液对四种植物病菌都有一定的抑制作用,抑制率为29.5%~45.2%。发酵液后工艺处理采用直接喷雾干燥的方法得到了TB2原粉。测定了原粉相关的质量指标。研究结果表明,活菌数为1 200亿个/g ,杂菌率≤3%,干燥减量4.5%~7%,pH值6.0~7.5,80%~90%可通过75μm试验筛,在室温和4℃条件下贮存半年活菌率为90%以上。TB2菌粉分别配制成1:500,1:1 000,1:1 500,1:2 000倍稀释液对香蕉贮藏期病害、辣椒采后果及辣椒苗期疫病盆栽防治试验。试验结果表明,TB2菌株原粉对香蕉贮藏期轴腐病、炭疽病,辣椒疫病有一定的防治作用。以1:500处理组的效果最佳,其对香蕉轴腐病和炭疽病的相对防效为34.32%~66.32%和62.42% ~73.90%,辣椒采后果和辣椒苗期疫病为61.51%~76.39%和63.30%~86.60%。TB2菌株处理可抑制病害扩展速度、延迟发病。另外,TB2菌剂对辣椒幼苗有较好的促生作用。本研究为该菌株的药效评价和安全、合理使用技术提供了依据。
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