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扩张床吸附分离技术是近十几年来出现的一种新型生物分离模式,与传统的固定床层析技术相比,该技术可以直接处理含固体颗粒的料液,并且一步完成碎片清除、料液浓缩和产物纯化等分离操作,缩短分离流程,节省分离时间。扩张床吸附分离技术主要应用于蛋白质分离纯化领域,目前仅有本实验探索了扩张床在水溶性天然产物分离纯化中的应用。至于利用扩张床分离纯化水溶性较差的天然产物,还没有文献报道。
围绕扩张床分离提纯难溶于水的天然产物这一课题,本文主要开展了以下几个方面的研究工作:
1、以异黄酮为目标产物,考察了8种不同骨架、孔径的树脂对异黄酮的吸附分离性能,其中包括本实验室新合成的孔径为1000nm的超大孔聚苯乙烯树脂。实验结果表明,超大孔聚苯乙烯树脂对于异黄酮有良好的吸附分离性能,而且解吸时仅需要20%乙醇水溶液(V/V)为洗脱剂。
2、考察了流速、液体粘度和不同床层高度对超大孔树脂的扩张特性和流体力学行为的影响。结果表明,当扩张比范围为1.3-1.6倍时,超大孔树脂扩张床的轴向混合系数(Dax)数量级为10-6m2/s,符合经典蛋白质扩张床层析的流体力学范围。
3、以超大孔聚苯乙烯树脂为吸附剂,以异黄酮浸提液为流动相,研究了扩张床的吸附、淋洗和洗脱行为。结果表明,采用扩张床层析分离异黄酮,可将含量为4.67%的异黄酮粗品提高到29.6%(w/w),回收率高达92.7%。与传统的大孔树脂吸附法的8步操作相比,扩张床技术仅需3步操作。缩短了操作工艺,节省了操作成本。同时本方法大幅度地降低了洗脱剂中乙醇的用量,避免了大量使用有机溶剂带来的环境污染和安全隐患。
4、在前期工作的基础上,以超大孔聚苯乙烯树脂为吸附剂,利用扩张床层析分离葛根素。结果表明,采用扩张床层析分离葛根素,产品纯度由0.018%(w/w)上升至1.5%(w/w),纯化倍数高达83倍,回收率达92.3%。与传统的4步液液萃取法相比,操作简单,纯化倍数高。