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枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)为原产于我国的蔷薇科枇杷属植物,根据果肉颜色可分为红肉枇杷和白肉枇杷。红肉枇杷‘洛阳青’采后0℃冷藏易发生冷害,出现冷害木质化现象,表现为果肉粗糙少汁、果实硬度升高和木质素积累等,影响果实商品品质。前期研究表明热激(HT)和程序性降温(LTC)等处理均可减缓采后冷害木质化,改善果实品质。本文以红肉枇杷‘洛阳青’为研究材料,通过实时荧光定量PCR、酵母单杂、双分子荧光互补和双荧光素酶分析等技术手段,探究HT和LTC减缓冷害木质化的调控新途径。主要结果如下:1、EjCAD5为响应HT处理减缓果实冷害木质化的CAD基因家族成员。0℃低温处理诱导枇杷果实冷害木质化,伴随有肉桂醇脱氢酶(CAD)活性升高,HT处理可抑制CAD活性的升高;利用枇杷转录组数据分离克隆得到4个新的CAD基因家族成员,其中EjCAD3和EjCAD5的表达受0℃诱导上调和HT抑制,体外功能验证发现EjCAD5对木质素单体合成前体物松柏醛、芥子醛和香豆醛具有较高的催化能力,EjCAD3整体催化能力较弱。2、EjHAT1为响应HT处理减缓枇杷果实冷害木质化的转录因子。以EjCAD5为靶标,通过酵母单杂筛选得到结合EjCAD5启动子的转录因子EjHAT1。EjHAT1受0℃抑制表达下调,HT处理可减缓低温对EjAHT1表达的抑制。双荧光素酶分析表明EjHAT1通过结合EjCAD5启动子上的HD-Zip顺式作用元件进而抑制其启动子的活性;HT处理上调EjHAT1表达从而增强对EjCAD5启动子的抑制,减缓冷害木质化。3、EjbHLH1为响应LTC处理减缓枇杷果实冷害木质化的转录因子。利用转录组克隆得到LTC响应的bHLH转录因子成员EjbHLH1,其基因表达水平与组织木质素含量变化呈负相关。双荧光素酶分析结果表明EjbHLH1可抑制Ej4CL1表达。然而酵母单杂表明EjbHLH1不能直接结合Ej4CL1启动子。BIFC和LCI的结果表明EjbHLH1可分别与EjAP2-1和EjMYB2蛋白互作。双荧光素酶实验发现这三个转录因子对Ej4CL1启动子具有协同调控效应。可见,EjbHLH1可通过与EjMYB2和EjAP2-1蛋白互作间接调控Ej4CL1参与冷害木质化调控。本研究发现了两个参与枇杷果实冷害木质化的新转录因子EjHAT1和EjbHLH1,并确定了一个靶向结构基因EjCAD5。EjHAT1响应HT处理,通过调控EjCAD5的表达延缓枇杷采后冷害木质化。LTC响应的转录因子EjbHLH1通过与EjAP2-1和EjMYB2蛋白互作间接调控Ej4CL1表达,参与枇杷采后冷害木质化进程。该研究进一步丰富了木质素转录调控网络,为改善采后果实品质提供了理论基础。