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背景与目的近年来人们对泛素化过程参与多种肿瘤的形成认识越来越深入,E3泛素连接酶为泛素化过程中特异性识别底物的酶,其参与肿瘤的机制可能与其对细胞的增殖、衰老及信号通路的调控紊乱有关。2010年日本学者GWAS研究发现E3泛素连接酶NEDD4-1基因可能与瘢痕疙瘩有关。E3泛素连接酶WWP1(The WW domain containing E3 ubiquitin protein ligase 1),为NEDD4蛋白家族成员之一,与该家族其他蛋白一样也包含HECT及WW结构域。WWP1已被证实在多种肿瘤中表达异常,其中乳腺癌和前列腺癌是报道最为详实的两种类型。P53基因是一种公认的抑癌基因,位于染色体17q13.1,与肿瘤发病机制的研究众多,参与细胞凋亡及细胞周期调控、DNA损伤修复、肿瘤发生发展等过程。瘢痕疙瘩以侵袭性生长为特征的成纤维细胞增殖凋亡异常及细胞外基质过度沉积的疾病,可能与控制凋亡的基因功能缺失有关。本实验通过免疫组织化学法(Immunohistochemistry,ICH)和RT-PCR法分别检测瘢痕疙瘩与正常皮肤组织WWP1、P53表达并比较是否有差异,进而探讨二者与瘢痕疙瘩形成是否相关。材料与方法选取瘢痕疙瘩标本10例,年龄10~52岁(33.1±9.7),其中男6例,女4例,正常皮肤标本10例年龄10~52岁(31.8±7.4),所取标本分为2部分,一部分行RT-PCR,检测组织中WWP1、P53m RNA表达;另一部分作免疫组化,检测组织中WWP1、P53蛋白表达。将-80°C液氮中保存的瘢痕疙瘩组织及正常皮肤组织取出放入加了TRIzol RNA提取液的匀浆器,提取组织中总RNA,并用紫外分光光度计检测RNA浓度和纯度,将RNA逆转录为c DNA,进行PCR扩增。另一部分组织经切片、脱蜡、加入抗体、孵育、显色,脱水封片后显微镜下观察并拍照。使用Image-Pro Plus图像分析系统进行分析,测定泛素转移酶E3及P53蛋白累积光密度(Integrated Optical Density,IOD)值。结果对两组中P53蛋白染色发现,瘢痕疙瘩组织内少见阳性细胞,瘢痕疙瘩组织中P53蛋白染色IOD值显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。而瘢痕疙瘩组织泛素连接酶E3 WWP1染色IOD值显著增加且差异有统计学意义(P<0.05)。与正常皮肤相比,瘢痕疙瘩组织泛素连接酶E3 WWP1 m RNA表达水平显著增加,而P53 m RNA的表达情况相较对照组显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论本实验对于瘢痕疙瘩WWP1、P53的表达研究,发现P53表达减少,而WWP1表达增多。说明在瘢痕疙瘩中P53表达异常导致功能缺失,实验对WWP1水平检测,发现表达明显增高,推测可能WWP1通过泛素化修饰P53蛋白,因此瘢痕疙瘩的形成中成纤维细胞异常增殖可能与P53功能缺失有关,而WWP1能够通过对P53的调控来实现细胞周期的控制。