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目的同种异体角膜移植是治疗角膜盲最为有效的方法,而角膜移植排斥反应仍然是移植失败的主要原因;角膜新生血管是角膜盲的主要原因,亦是角膜移植排斥反应的高危因素。因此,如何防治角膜移植术后排斥反应及新生血管一直是角膜病研究领域的重点和难点。目前的研究表明,角膜的炎症、感染、变性、外伤都会使血管生成因子和抗血管发生因子之间的平衡倾斜,刺激原有角膜缘血管生成CNV。一氧化氮不仅是一种内源性血管扩张剂还是一种炎症介质。iNOS是一氧化氮生成的合成酶,催化机体产生一氧化氮参与血管生成、肿瘤发展和转移等过程。有关iNOS在CNV发生过程中的作用报道很少,且有完全相反结论的报道。我们可以认为iNOS与CNV的发生发展有密切关系。此外,一系列体内和体外试验提示NO具有免疫作用。因此,iNOS有可能参与了角膜移植排斥反应及新生血管形成的过程。方法随机选取健康成年雌性Wistar大鼠15只为供体,雄性SD大鼠30只为受体,做异体角膜移植为实验组,另取18只做自体角膜移植为移植对照组。余3只SD大鼠(6眼)作为正常对照组。术后,每日于裂隙灯显微镜下观察角膜以及眼前段组织的变化。于术后第1d,3d,7d,14d,21d,28d各随机处死5只异体角膜移植实验组大鼠,2只自体角膜移植对照组大鼠正常组3只大鼠于实验结束前处死,取角膜标本行石蜡切片、苏木素-伊红(hemotoxylin and eosin, HE)染色观察新生血管生长和炎性浸润情况;以免疫组织化学方法检测角膜移植片iNOS的表达水平。每张切片角膜中央区随机取5个400倍视野,使用计算机图像分析软件计算平均灰密度值,取其平均值作为该标本各检测指标的表达率。结果(一)角膜新生血管及植片存活情况异体角膜移植术后1d可见明显水肿,术后7d可见角膜新生血管长入植片,14d为高峰,21d以后逐渐消退。自体对照组新生血管及排斥反应均未及异体移植组明显。(二)组织病理学检查术后1天时异体角膜移植实验组切片可见轻度水肿,少量炎性细胞浸润,7d时可见大量炎性细胞及新生血管,14d时达到高峰,21d以后炎性细胞减少新生血管萎缩。自体移植对照组无论是炎性细胞数还是新生血管数量均未及异体移植实验组。(三)免疫组织化学iNOS在正常对照组大鼠角膜上皮层及基质层仅有少量表达,术后各时间点自体、异体角膜移植实验组均较正常对照组表达明显增强(P=0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.001、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000,F=236.453、132.785、144.727、326.412、163.883、53.116、25.868、140.831、123.902、64.913、264.474、378.131),表达范围主要在基质层炎性细胞、角膜上皮细胞及新生血管内皮细胞胞浆内。异体移植实验组及自体移植对照组均在术后第14d表达最强烈。3d后异体移植实验组iNOS的表达较同期自体移植对照组明显增强(P=0.002、0.025、0.042、0.027,0.034,F=19.912、7.804、6.043、8.645、6.527)。结论iNOS在大鼠异体角膜移植模型中的表达增加,并参与了大鼠异体角膜移植排斥反应及新生血管形成的过程。