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目的:探讨一种新的CD44剪切变异体16(CD44 variant 16,CD44v16)对乳腺癌细胞MCF7多柔比星耐药的影响并探究其参与并影响乳腺癌细胞MCF7多柔比星耐药的机制。方法:采用慢病毒感染法构建CD44v16过表达的MCF7细胞株MCF7-CD44v16,以及CD44v16沉默的MCF7/Adr细胞株MCF7/Adr-sh CD44v16。使用蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR法检测MCF7、MCF7-CD44v16、MCF7/Adr、MCF7/Adr-sh CD44v16四组细胞中CD44v16蛋白及m RNA的表达水平。采用CCK-8法检测MCF7、MCF7-CD44v16、MCF7/Adr、MCF7/Adr-sh CD44v16四组细胞的多柔比星半抑制浓度(IC50值),以及在相同浓度多柔比星(10μg/m L)处理后四组细胞的生长情况。采用罗丹明潴留实验检测四组细胞的罗丹明潴留能力以表示其化疗耐药能力。采用实时荧光定量PCR法检测四组细胞中MRP1等多种乳腺癌耐药相关基因的表达水平。采用蛋白质印迹法检测四组细胞中自噬相关蛋白Beclin-1及LC3II的表达水平。用自噬抑制剂氯喹(30 nmol/L)处理四组细胞并设立对照,再次采用CCK-8和实时荧光定量PCR法分别检测各细胞的IC50值和耐药相关基因的表达变化情况。结果:采用蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR法测得MCF7、MCF7-CD44v16、MCF7/Adr、MCF7/Adr-sh CD44v16四组细胞中CD44v16蛋白及m RNA的表达水平有明显差异(P<0.05)。MCF7-CD44v16细胞中CD44v16蛋白及m RNA表达量明显高于MCF7细胞,而MCF7/Adr-sh CD44v16细胞较MCF7/Adr细胞表达水平更低。采用CCK-8法检测MCF7、MCF7-CD44v16、MCF7/Adr、MCF7/Adr-sh CD44v16四组细胞的IC50值分别为5.51±0.52μg/m L、110±9.23μg/m L、256±15.69μg/m L、164±7.69μg/m L,CD44v16基因的表达水平与细胞的IC50值呈正相关。采用CCK8法检测各组细胞在多柔比星存在的情况下的生长曲线,结果发现MCF7-CD44v16细胞生长情况较MCF7细胞好,相反MCF7/Adr-sh CD44v16细胞生长情况较MCF7/Adr细胞差。采用罗丹明潴留实验发现MCF7细胞的罗丹明平均荧光强度高于MCF7-CD44v16细胞,而MCF7/Adr细胞则低于MCF7/Adr-sh CD44v16细胞。采用实时荧光定量PCR法检测四组细胞中数种耐药相关基因的相对表达量,结果发现差异较明显的耐药基因有MRP1、LRP和ERCC1(P<0.05),而TOPOII、BCRP、Cyclin D1及AIB-1基因则变化不明显(P>0.05)。比较特别的是,GST-π基因在MCF7及MCF7-CD44v16细胞中表达无明显差异(P>0.05),而在MCF7/Adr及MCF7/Adr-sh CD44v16细胞株中有差异(P<0.05)。采用蛋白印迹法检测四组细胞中自噬相关蛋白Beclin-1及LC3II的表达水平,结果发现不同细胞中自噬相关蛋白表达情况具有明显差异,MCF7-CD44v16细胞株中自噬蛋白表达量较MCF7细胞株高,而MCF7/Adr-sh CD44v16细胞株中自噬蛋白表达量较对照低。采用CCK8法检测不同细胞在不同处理后的IC50值,结果发现在自噬抑制剂氯喹(30n M)处理后,与未加氯喹的对照组细胞相比各组细胞的IC50值均有所下降(P<0.05),耐药相关基因MRP1、LRP和ERCC1的表达水平也明显降低(P<0.05)。结论:1.CD44v16的异常表达能够影响乳腺癌细胞MCF7对多柔比星的化疗耐药。CD44v16表达水平越高的乳腺癌细胞对多柔比星耐药的能力越强,反之亦然。2.CD44v16的异常表达导致MRP1、LRP和ERCC1三种乳腺癌相关耐药基因发生变化。3.CD44v16能够引起乳腺癌细胞自噬的发生。4.使用细胞自噬抑制剂氯喹处理后与对照相比各组细胞的耐药能力减弱。CD44v16可能是通过细胞自噬途径增强了乳腺癌MCF7细胞对多柔比星的化疗耐药。