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目的耐辐射奇球菌（Deinococcus Radiodurans，DR）对于电离辐照及多种极端环境具有极强的抗性，有研究提示pprM基因可能对DR菌的极强辐射抗性具有重要作用。本研究拟构建pprM及其DNA结合域敲除株DR1△pprM和DR1pprM△CSD，并分析其基因敲除株在极端环境条件下的抗性变化，综合探讨pprM及其DNA结合功能在DR菌的辐射抗性中所起的作用。方法1.运用生物信息学方法对pprM基因、pprM基因DNA结合域及其对应蛋白产物PprM的理化性质、高级结构及生物学功能等进行分析与预测；2.利用体外overlap PCR连接、体内同源重组的方法对DR pprM基因、pprM基因DNA结合域进行基因敲除，紫外辐照、丝裂霉素C（MMC）和H2O2处理后对DR野生株和pprM及其DNA结合域基因敲除株的生存率等进行分析。初步研究pprM基因DNA结合域在DR菌体内的生物学功能。结果1.生物信息学分析结果显示，PprM编码蛋白是一种含有Cold-ShockDNA-binding domain（冷休克DNA结合域）的DNA结合蛋白。进一步的pprM基因结构分析发现pprM是cspA基因的同源基因，CspA蛋白可作为转录调控因子通过结合于其他DNA损伤修复相关基因的启动子区域调控其表达。2.以耐辐射奇球菌基因组DNA为模板，通过普通PCR方法获得pprM基因及其DNA结合域3’端片段片段及5’端片段，以PCR产物为模板通过overlapPCR的方法获得pprM基因缺失的DNA片段△pprM，同理可获得pprM DNA结合域缺失的DNA片段pprM△CSD，将获得的目的片段与基因敲除载体pk18mobsacB连接，转化大肠杆菌JM109感受态，提取质粒，酶切鉴定，进一步测序鉴定分析，结果显示基因敲除重组载体pk18mobsacB-△pprM和pk18mobsacB-pprM△CSD构建成功。将重组载体电转化DR菌感受态，两次筛选得到pprM基因及其DNA结合域敲除株。pprM及其DNA结合域基因敲除株生长速度变缓。紫外辐照、丝裂霉素C处理后，结果显示pprM DNA结合域敲除株与pprM基因敲除株类似，与DR野生株相比前两者生存率均下降。H2O2处理结果发现， pprM及其DNA结合域基因敲除对DR氧化抗性影响相对较小。结论1.生物信息学分析显示pprM含有Cold-Shock DNA-binding domain（冷休克DNA结合域），推测pprM可能作为转录调控因子对DR菌的极端抗性具有作用。2.成功构建耐辐射奇球菌pprM及其DNA结合域基因敲除株。3. pprM DNA结合域敲除株与pprM基因敲除株生长速度变缓且均表现出对紫外辐射及丝裂霉素C处理的抗性下降，提示pprM及其DNA结合功能对DR菌的极端环境抗性具有一定作用。