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（一）血友病B是血浆凝血IX因子缺乏所导致的Ｘ连锁隐性出血性遗传病，在男性患病率约为三万分之一。目前该病的治疗主要以输注血浆hFIX制品或重组的hFIX为主。而基因治疗是可能根治该病的安全、有效方法。在本项研究中，我们分别构建了由Ubiquitin启动子、肝细胞特异性启动子（ABP启动子）调控的人凝血因子IX基因的重组慢病毒载体FAXW、FUXW，并通过磷酸钙三质粒共转染的方法制备重组慢病毒。Southern Dot Blot法测定病毒的滴度，观察了慢病毒介导的人凝血因子Ⅸ cDNA在离体培养细胞和血友病B小鼠中的表达水平,为进一步的临床前试验打下了基础。在重组FUXW病毒离体转染的293T、BHK、L-02细胞上清中皆有较高水平的hFIX的表达，hFIX蛋白表达量分别是BHK:465ng/106cell/72h, 293T:613ng/ 106cell/72h, L-02(肝细胞):300ng/ 106cell /72h. 而重组FAXW病毒仅在L-02细胞中有hFIX高表达（630/106cell/72h），在其他转染细胞中hFIX表达很低。转染FUGW的细胞72h后可以观察到荧光，最多时80％以上细胞呈荧光。将不同剂量的重组FAXW、FUXW病毒，分别用尾静脉液压法和静脉缓注法注射入血友病B小鼠体内,各治疗组小鼠血浆均可持续检测到hFIX抗原,最高峰值为45ng/mL,表达持续超过60天.hFIX蛋白的表达与病毒的剂量成正相关,重组FAXW病毒的hFIX表达量高于重组FUXW病毒, 尾静脉液压组和静脉缓注组在表达量、表达时间上没有显著差异。（二）为了探讨重组慢病毒介导血友病B宫内基因治疗可行性，我们采用肝特异启动子ABP指导hFIX基因表达的重组慢病毒，通过肝脏途径直接注射到17－<WP=4>19天的胎鼠，结果在新生鼠中都有hFIX基因的表达，最高峰值为52ng/mL,表达时间持续超过30天，同时没有检测到针对hFIX蛋白的抗体。以上结果提示重组慢病毒介导的血友病B宫内基因治疗是可行的。PCR、RT-PCR结果表明，病毒载体主要分布在新生鼠的肝、脾和心脏，而只在肝脏中观察到hFIX的转录本。另外，本实验中未发现新生鼠生殖细胞和母鼠体内的基因转移和治疗相关的毒副反应。