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目的:孕酮和脂联素分子受体3(progestin and adipoQ receptor 3,PAQR3)又称Raf激酶高尔基体锚定蛋白(raf kinase trapping to Golgi,RKTG)。近年来,关于PAQR3功能的研究越来越多,它不仅参与了多种癌症的发生发展,而且参与了细胞自噬、炎症、能量代谢、细胞抗氧化反应等多种生物学过程的调控。结直肠癌是世界范围内常见的一种癌症,严重危害人类健康。而结直肠癌的发生、发展除了与基因序列改变、基因突变有关外,表观遗传学改变也发挥着重要作用。基因启动子甲基化、组蛋白修饰等表观遗传学改变,是人类癌症研究中的一项重大发现。大部分人类基因CpG岛的5’启动子区域通常都是非甲基化状态,而在恶性肿瘤中CpG岛会发生全部或局部的基因甲基化,这为癌症的治疗提供了一个高度特异的靶点。盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride,PCA)作为局麻药被广泛应用于临床,人们熟知其药理及毒理作用,且成本低廉,但其去甲基化的作用却极少被利用。课题组前期探索了PAQR3在结直肠癌组织中的甲基化水平,本次实验将从细胞层面探索结直肠癌中PAQR3基因甲基化状态,以及盐酸普鲁卡因是否可以逆转PAQR3基因的甲基化状态,为结直肠癌的治疗提供新思路。方法:通过实时定量聚合酶链反应(real-time PCR,RT-PCR)检测PAQR3 mRNA在sw620、colo205、sw480三种结肠癌细胞中的表达水平;通过甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测PAQR3在结肠癌细胞中的甲基化状态;通过蛋白电泳(Western blot)检测不同浓度盐酸普鲁卡因处理的sw480细胞中PAQR3蛋白的表达情况;通过MSP检测盐酸普鲁卡因处理后结肠癌细胞中PAQR3的甲基化状态。结果:(1)在三种结肠癌细胞中PAQR3 mRNA呈低表达状态。PAQR3 mRNA在三种结肠癌细胞中的表达不同,经方差分析,差异有统计学意义(F=458.391,P=0.000);与sw620细胞相比,sw480和colo205细胞中PAQR3 mRNA表达较高(P<0.05)。(2)PAQR3在结肠癌细胞中呈甲基化状态。三种结肠癌细胞中PAQR3基因甲基化的百分比不同,经?~2检验,差异有统计学意义(?~2=3625.054,P=0.000);与sw620细胞相比,sw480和colo205细胞中PAQR3甲基化百分比明显降低(P<0.05)。(3)盐酸普鲁卡因可上调结肠癌细胞中PAQR3蛋白的表达量。不同浓度盐酸普鲁卡因处理后,结肠癌细胞中PAQR3蛋白的相对表达量不同,经方差分析,差异有统计学意义(F=49.424,P=0.000);与对照组相比,实验组中PAQR3蛋白的相对表达量增加(P<0.05)。(4)盐酸普鲁卡因可部分逆转三种结肠癌细胞中PAQR3的甲基化状态。盐酸普鲁卡因处理后,三种结肠癌细胞中PAQR3甲基化百分比明显降低,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:PAQR3在结肠癌细胞中低表达,可能与其发生启动子甲基化有关;盐酸普鲁卡因可使结肠癌细胞中的PAQR3去甲基化,上调PAQR3蛋白表达。