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血管新生(angiogenesis)，指从已存在的血管床中产生的新生血管系统。涉及胞外基质蛋白的降解，内皮细胞的激活、增殖、迁移等，是一个多步骤的过程。血管新生过程受到多种血管生成因子、细胞因子及其抑制因子之间的调控。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前研究最多、作用最强和特异性最高的血管新生调控因子，是特异性的促内皮细胞丝裂原。VEGF主要与其两个酪氨酸激酶受体，即fms样酪氨酸激酶(fins-like tyrosine kinase-1，FLT-1)和含激酶域插入片段受体(kinase-domain insert containing receptor，KDR)特异性结合，发挥其内皮细胞丝裂原的生物活性。已研究表明，许多实体瘤其生长、浸润和转移表现为血管新生依赖性。 急性白血病是源于造血系统干细胞水平的恶性克隆性疾病，是一种“液体”肿瘤，是否和实体瘤一样也存在血管新生现象?1997年，Perez-Atayde等首次报道，儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)患者骨髓存在血管新生现象。近来国外对成人急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓存在血管新生有几篇文献报道，涉及急性淋巴细胞白血病患者骨髓血管新生仅有一篇，国内尚未见报道。成人急性白血病患者细胞VEGF及其受体FLT-1和KDR基因表达水平，患者细胞VEGF蛋白分泌水平在不同病期和不 浙江大学博土学位论文 同类型急性白血病之间是否有差异，患者骨髓液VEGF含量和骨髓微血管数之间 的关系等，在国内外尚未见阐明。高三尖杉酯碱（HomoM巾屿…nine，HHT）是 否也能使白血病细胞VEGF的表达下降，进而影响血管新生反应，发挥抗白血病 效应？国内外尚未见报道。 我们以95例急性白血病患者（包括初发未治70例，复发难治5例和骨髓缓 解 20例）和 15名正常成人骨髓活检组织标本为研究对象。采用免疫组织化学方 法，以兔抗人凝血因于皿相关抗原（Fattof h－RClatCd Afitigap VOfl illCbfalld Factofg vWF）多克隆抗体作为内皮细胞标记物，光学显微镜下（X 400，每个视 野代表面积为0．233nun刁计数全骨髓切片微血管数（将各个视野微血管数的平 均值定为该片的微血管数）。结果显示，初发未治组骨髓微血管数（23．09士3．741 X400视野）高于正常对照组（7．41士l．49／X44视野）及骨髓缓解组（8．40士l．20／ x400视野）中均＜0．001），而骨髓缓解组骨髓微血管数仍高于正常对照组，其差 异有统计学意义（pod．05）；初发未治组与复发难治组之间骨髓微血管数的差异无 统计学意义（p＞0．05）。初发未治组中，骨髓微血管数在23例ALL患者与43例 急性非淋巴细胞白血病（acute nonlpophoblastic leukemia， ANLL）患者之间的差， 异无统计学意义（23．90士4．14／x400视野vs 22石1士3二1／X400视野，pod．05）； FAB亚型 Ml。和 i。患者之间骨髓微血管数的差异亦无统计学意义（22．89土 3．50／X400视野VS22二7士2．96／X400视野，p＞0．05）；骨髓微血管数与骨髓原始细 胞百分数呈一定的相关性（r－－AI．311，厂刀刀09）；初诊时骨髓微血管数在治疗后获骨 髓缓解患者与未获骨髓缓解患者之间的差异无统计学意义（p吻．05）。研究结果 表明，急性白血病患者骨髓均存在微血管数增多。初诊时患者骨髓微血管数不是 诱导治疗后能否获得骨髓缓解的预后指标。 为探讨血管新生调控因子VEGF在急性白血病患者发病过程中的可能作用， 我们采用RT－PCR、骨髓单个核细胞体外培养、ELISA检测及MTT比色等方法，：对不同病期和不同类型急性白血病患者骨髓单个核细胞（MNCS）VEGFmRNA 2 浙江大学博土学位论文 及其受体 FLT－IInRNA和 KDRmRNA表达水平、骨髓液和骨髓 MNCs培养上清 液VEGF的含量、骨髓MNCs培养上清液体外对人脐静脉内皮细胞株ECV304 细胞增殖影响，以及骨髓液VEGF含量和骨髓微血管数的关系等进行了研究。 本研究采用RT．PCR方法，检测69例急性白血病患者和16名正常对照者骨 髓MNCsVEGFmRNA表达。结果显示，48／49例急性白血病初发未治患者、3／3 例复发患者、16／17例骨髓缓解患者和13／16名正常对照者骨髓MNCs