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目的通过观察柔红霉素(DNR)作用后急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60敏感细胞中microRNA-21、microRNA-181d、microRNA-125b、 let-7f和microRNA-27a等5种microRNAs (miRNAs)的表达变化,探讨这些miRNAs表达与HL-60细胞耐药性形成的相关性及其潜在的临床意义。方法应用常规细胞培养方法培养HL-60敏感细胞和HL-60/A DNR耐药细胞。设置实验组、对照组1和对照组2。实验组是使用小剂量DNR持续作用于HL-60敏感细胞,以观察DNR对HL-60敏感细胞的增殖和miRNAs表达的影响。对照组1和2分别是HL-60/A DNR耐药细胞和不接受DNR持续作用的HL-60敏感细胞。用MTT(四甲基偶氮唑盐)试验检测DNR对HL-60细胞增值的影响。用TaKaRa公司的小RNA提取试剂盒(RNAiso for small RNA)分别提取各组细胞的小RNA,用实时荧光定量PCR方法检测miRNA-21. miRNA-181d、miRNA-125b、let-7f和miRNA-27a等5种miRNAs的表达量,用克隆测序方法分析上述5种miRNAs PCR产物的碱基序列。结果1.MTT试验：结果显示随着小剂量DNR持续作用时间的延长,DNR对HL-60敏感细胞的抑制作用减弱,并于加药后的第10天左右,抑制率逐渐进入平台期,这时DNR对细胞的抑制率不再随着时间的延长而增加；2. miRNA实时荧光定量RT-PCR的检测结果：与对照组2相比,对照组1耐药细胞中的miRNA-181d、miRNA-27a和let-7f的表达下调(P<0.05),而实验组敏感细胞中这些miRNAs的表达则于加药后的第7天开始下调(P<0.05)。相反,对照组1耐药细胞中的miRNA-21和miRNA-125b表达上调(P<0.05),而实验组敏感细胞中这2种miRNAs的表达则于加药后的第7天开始上调(P<0.05);3. miRNA PCR产物的克隆测序结果：结果显示5种受检miRNAs PCR产物的碱基序列与预期的miRNAs的碱基序列一致,表明本研究所用的实时荧光定量RT-PCR引物可以特异性地扩增HL-60细胞中的靶miRNAs。结论1.HL-60敏感细胞经过小剂量DNR持续作用之后,DNR对HL-60敏感细胞的抑制率会逐步降低,并于用药后的第10天左右进入平台期。2.miRNA-21、miRNA-125b、miRNA-181d、miRNA-27a和let-7f等5种miRNAs的表达改变可能与HL-60细胞耐药性的产生有关。3.以上这些发现对于今后预测和控制APL细胞耐药性的产生可能具有一定的指导意义,值得进一步观察验证。