紫色酸性磷酸酶MtPAP2和MtPAP3在苜蓿根瘤和菌根共生中的功能研究

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紫色酸性磷酸酶(purple acid phosphatase,PAP)是酸性磷酸酶中最主要的一类,对于活化植物根际周围的有机态磷及促进植物组织内有机磷的分解和循环利用发挥着重要作用。本研究以蒺藜苜蓿中的两个PAP家族的酸性磷酸酶MtPAP2和MtPAP3为研究对象,利用时空表达、化学组织定位、超表达、RNAi和CRISPR/Cas9等方法研究了其在苜蓿与根瘤菌、菌根真菌共生过程中的作用。主要研究结果如下:1.MtPAP2在苜蓿的根茎叶中均有表达,其在叶中表达量最高;在接种根瘤菌或AM真菌后,该基因在根瘤或菌根中的表达量显著提高。磷诱导结果显示,MtPAP2在根中的表达并不受磷胁迫诱导,说明该蛋白不参与植物对低磷胁迫的应答。2.时空基因表达和启动子组织表达定位显示,MtPAP2受到根瘤菌和AM真菌的诱导表达,且主要在根瘤的分生区、侵染区、维管束组织和菌根中含丛枝以及相邻的皮层细胞中大量表达。3.MtPAP2基因超表达和沉默植株共生表型显示,MtPAP2的超量表达能显著提高根瘤数和固氮酶活,增加菌根的侵染率及丛枝丰度;MtPAP2基因的沉默能显著抑制根瘤的发育和固氮酶活,菌根中丛枝的形成和发育也受到影响,从枝丰度显著下降,表明该蛋白在苜蓿与根瘤、菌根真菌的共生中具有重要作用,其可能通过调节根组织内磷的代谢和在组织内的平衡分配进而调控植物与微生物的共生。4.MtPAP3在低磷胁迫的根和根瘤中诱导表达,且定位在根瘤的分生区、侵染区和维管束组织;超表达和突变植株共生表型显示,MtPAP3参与苜蓿根瘤中的磷代谢且影响共生体根瘤的发育。本研究获得了以上直接实验证据,为植物响应低磷胁迫和协调机体自身磷稳态的分子机制提供新见解。
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