【摘 要】
：
目的:探究连翘脂素对非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的药理作用及作用机制,为其开发应用提供科学依据。方法:（1）利用棕榈酸酯（PA）刺激肝细胞建立细胞脂质沉积模型;采用CCK8法筛选有效的造模浓度和给药浓度;（2）BODIPY 493/503和油红О染色检测肝细胞内脂质含量;（3）给予小鼠高脂饲料（HFD）构建NAFLD模型,通过全自
论文部分内容阅读
目的:探究连翘脂素对非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的药理作用及作用机制,为其开发应用提供科学依据。方法:（1）利用棕榈酸酯（PA）刺激肝细胞建立细胞脂质沉积模型;采用CCK8法筛选有效的造模浓度和给药浓度;（2）BODIPY 493/503和油红О染色检测肝细胞内脂质含量;（3）给予小鼠高脂饲料（HFD）构建NAFLD模型,通过全自动生化分析仪测定肝功能,H＆E染色和油红О染色观察肝组织形态及脂质沉积情况;（4）免疫荧光法及western blot检测自噬相关蛋白表达水平;（5）m Cherry-GFP-LC3B腺病毒转染AML12细胞,通过共聚焦显微镜检测自噬体和溶酶体的数目;（6）在CQ存在和不存在的情况下,通过western blot检测自噬标志物LC3B-II的转换率来评估自噬通量;（7）Western blot测定TFEB及其下游靶基因的表达情况;（8）RNA干扰敲低TFEB验证其在连翘脂素治疗NAFLD中的作用;（9）Fluo-4/AM检测Ca2+来源;（10）Western Blot及实时荧光定量PCR测定炎症相关因子的表达水平。结果:1.CCK8结果显示,0.4 m M的PA对肝细胞活力无明显影响且可使细胞出现脂质沉积,该浓度为细胞模型最佳造模条件;20μM的连翘脂素对肝细胞活性无明显影响。2.油红O染色和BODIPY 493/503染色结果表明连翘脂素可以减轻肝细胞中的脂质沉积（P＜0.05或P＜0.01）;同时肝细胞内的TG和TC水平也明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。3.PA处理后的肝细胞LC3B-II和p62同时增加（P＜0.05或P＜0.01）,表明肝细胞自噬流阻滞;连翘脂素改善了肝细胞的自噬流,表现在连翘脂素处理后p62蛋白积累减少（P＜0.05）,而LC3B-II蛋白积累增加（P＜0.05）。4.PA抑制了肝细胞内的溶酶体生物发生,导致溶酶体数量减少,自噬流阻滞;连翘脂素处理后,溶酶体数量增加,促进自噬溶酶体的形成,改善受损的自噬通量。5.PA抑制了肝细胞内TFEB的核易位,从而破坏了溶酶体的生物发生;连翘脂素处理后TFEB-自噬溶酶体途径被激活,去磷酸化的TFEB转移到细胞核中,从而促进溶酶体的生物生成。6.连翘脂素通过诱导内质网Ca2+释放,触发钙调神经磷酸酶依赖性的TFEB核易位,增强自噬,从而改善非酒精性脂肪肝。7.PA激活NLRP3炎症小体,诱导炎症因子释放;连翘脂素通过负调节自噬抑制炎症反应。8.与ND组相比,高脂饮食显著增加了小鼠的体重、肝重（P＜0.05或P＜0.01）,肝脂肪变性增加,存在较为明显的肝功能损伤、血脂异常和炎症;连翘脂素处理后小鼠体重降低（P＜0.05）,肝脏颜色恢复红润,肝组织中脂质积累减少,肝功能明显改善,炎症减少;TFEB敲除后,连翘脂素对NAFLD小鼠的改善作用被大大削弱。综上所述,连翘脂素通过调节肝细胞中的Ca2+-钙调神经磷酸酶-TFEB轴来恢复脂质自噬并进一步抑制脂肪变性和炎症。
其他文献
背景:间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）是一种成体多功能干细胞。由于MSCs的分化可塑性、强大的体外扩展能力和免疫特权已被广泛应用于细胞再生和组织修复领域,被认为是各种器官或组织再生的细胞治疗策略。间充质干细胞来源的外泌体（Exosomes derived from mesenchymal stem cells,MSCs-Exos）作为一种微粒子免疫载体分布于全
倍半萜合酶能催化单一线性底物法尼基焦磷酸（Farnesyl diphosphate,FPP）产生300多种具有不同立体结构的碳氢骨架,这些基本的碳氢骨架在生物体内进一步修饰形成上万种倍半萜化合物。倍半萜化合物在植物次生代谢中起着十分重要的作用,如保护植物免受捕食者、病原体、竞争者的侵害等,它们也广泛应用于农药、香料和调味剂等领域中,其中具有多种药理活性,如抗细菌、抗真菌和抗肿瘤等。相关研究表明,活
肥胖是全球范围的流行病,其特征是由于能量摄入超过能量消耗导致的脂质过度积累。过量的脂质积累会增加多种疾病的患病风险如:非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）、心血管疾病、糖尿病、高血压、血脂紊乱和癌症等。肠道菌群及其相关代谢物胆汁酸在上述疾病的发生发展中起着重要作用。黄芪甲苷（Astragaloside IV,AS-Ⅳ）作为一种提取自黄芪的
硫氰酸生成酶（Rhodanese）是生物体中一种重要的硫转移酶,参与氰化物解毒、硫代谢、氧化还原平衡等重要生理生化过程,有关硫氰酸生成酶的研究主要集中在脊椎动物和植物中,而在节肢动物中了解甚少。本研究从双翅目昆虫家蝇（Musca domestica）中克隆一条HSP67B2样硫氰酸生成酶基因MdRDH2,并对其活性和功能进行了探究。所得结果如下:1.MdRDH2序列长度为729 bp,具有1个49
视神经萎缩蛋白1（Optic atrophy 1,OPA1）和发动蛋白相关蛋白1（Dynamin-related protein 1,DRP1）是一类具有鸟苷三磷酸酶（GTPase）活性的发动蛋白（Dynamin）超家族成员。Dynamin超家族蛋白成员在细胞内吞、膜泡运输、膜分裂融合等过程中发挥关键作用。哺乳动物中,OPA1是核基因编码的线粒体蛋白,靶向线粒体内膜,于线粒体膜间隙发挥作用。DRP
富含半胱氨酸的蛋白（Cysteine-rich protein,CRP）是广泛存在于动物体内的高度保守的小蛋白,具有LIM结构域,是LIM蛋白质家族的基本成员。研究发现哺乳动物CRP具有锌离子转运活性,并参与生物体的生长发育和免疫调控等生理过程,与癌症等多种疾病密切相关,但其作用的分子机制尚不清楚。本实验室前期从日本沼虾（Macrobrachium nipponense）中鉴定了两条CRP基因家族
DNA损伤修复是生命体重要的自我保护机制。当基因组产生严重损伤时,细胞可以通过DNA损伤修复系统修复DNA损伤以维持基因组的稳定性。DNA损伤修复相关基因在DNA损伤应答系统中起着关键作用,他们的功能性改变对癌症的发生、发展和治疗起着重要作用。人源Fibrillarin（FBL）是一种高度保守的核仁甲基转移酶,负责核糖体RNA和蛋白质的甲基化。在正常生理条件下,FBL定位于核仁,主要包含N端富含精
肥胖（obesity）被定义为身体脂肪积累过剩。机体热量摄入和消耗之间的能量失衡会导致异常或过量的脂肪堆积,超过体重的30%会严重影响身体健康。合理饮食结合适当锻炼或药物控制是现在主流的减肥方法,但这些方法的治疗周期长,复胖率高且持续减重效果不理想,所以人们迫切需要一个行之有效的治疗方案。肠道微生物群是影响哺乳动物肥胖和代谢稳态的一个新兴因素,肠道微生物群的功能和结构失调会增加肥胖及其并发症的风险
大清河位于华北平原中部,是海河流域的重要支流,它既是保定及东淀地区的重要灌溉源,亦是雄安新区发展的重要支撑生态水体。本研究于2019年9月（秋季）和2020年6月（夏季）对大清河流域46个点位进行了理化因子测定及浮游植物调查,构建基于浮游植物完整性指数的河流健康评价指标体系（P-IBI）,对各点位健康状况做出评估。并通过研究浮游植物完整性指数与环境因子的相关关系,探讨环境因子对河流浮游植物生物完整
蜘蛛是陆地上物种多样性较为丰富的捕食类群之一。黄河下游农区农业的快速发展以及自然的变化使农区生态环境遭受破坏,由于蜘蛛对环境依赖程度高,为了加强对农区蜘蛛多样性的保护,防止黄河下游农区蜘蛛多样性锐减,以维持农业的可持续发展,因此在科技基础资源调查专项项目的支持下,以土壤蜘蛛为研究对象,在2019-2021年对黄河下游农区农田、杂草地、杨树林三个生境的蜘蛛物种多样性、群落结构以及环境因子与蜘蛛物种多