雄激素受体及其亚型在前列腺癌进展中的实验研究

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目的:1.建立雄激素非依赖性LNCaP前列腺癌细胞模型;2.研究雄激素受体及其亚型在LNCaP前列腺癌进展中的作用。3.研究雄激素非依赖性LNCaP前列腺癌细胞的凋亡。 方法:1.在常规RPMI 1640培养液中,对依赖雄激素生长的父代LNCaP前列腺癌细胞进行连续传代培养,依传代次数的不同,依次建立LNCaP C-33,C-51和C-81三种前列腺癌亚细胞株。然后用双氢睾酮和氟他胺在体内和体外实验中对上述三种LNCaP前列腺癌亚细胞株的生长特性及其雄激素依赖性进行研究,以论证所建立的前列腺癌细胞模型。2.用RT-PCR和Western Blot方法检测三种LNCaP前列腺癌亚细胞株中AR mRNA和AR蛋白的表达水平。3.放免法检测不同LNCaP前列腺癌亚细胞株的PSA分泌。4.Western Blot方法检测DHT对不同LNCaP前列腺癌亚细胞株PSA分泌的影响。5.MTT法检测不同LNCaP前列腺癌亚细胞株的细胞活力。6.DNA片段电泳分析和Annexin V-PI双染法流式细胞仪检测不同LNCaP前列腺癌亚细胞株的细胞凋亡。 结果:1.本实验建立了LNCaP C-33,C-51和C-81三种前列腺癌亚细胞株,经论证这三种前列腺癌亚细胞株具有不同的生长特性及其雄激素依赖性,其中LNCaPC-81前列腺癌亚细胞株为雄激素非依赖性的前列腺癌细胞,因此建立了雄激素非依赖性LNCaP前列腺癌细胞模型。2.RT-PCR和Western Blot检测显示,AR mRNA和总AP蛋白在3种LNCaP前列腺癌亚细胞株中的表达无差异,但LNCaP C-81细胞表现有特征性的AR-A亚型表达增加和AR-B亚型表达降低。3.放免法检测到3种LNCaP前列腺癌亚细胞株的PSA分泌有差异,其中LNCaP C-81前列腺癌亚细胞株的PSA分泌水平最高。4.Western Blot检测到DHT对LNCaP C-33亚细胞株PSA分泌的刺激作用要强于LNCaP C-81亚细胞株。5.MTT法检测到LNCaP C-81前列腺癌亚细胞株比LNCaP C-33和C-51前列腺癌亚细胞株有更强的活力。6.DNALadder和Annexin V-PI双染法流式细胞仪检测到LNCaP C-81亚细胞株的抗凋亡能力强于LNCaP C-33和C-51亚细胞株。 结论:1.体内和体外研究结果证实,在常规RPMI 1640细胞培养液中,对依赖雄激素的父代LNCaP前列腺癌细胞进行连续传代培养时,LNCaP前列腺癌细胞的生物学行为会发生改变。随传代次数的增加,LNCaP前列腺癌细胞对雄激素的依赖性逐渐降低,显示了LNCaP前列腺癌细胞由雄激素依赖性生长转变为雄激素非依赖性生长的过程。本实验建立的LNCaP前列腺癌细胞模型为雄激素非依赖性细胞模型,它可模拟临床上在未进行雄激素干预治疗时前列腺癌的进展过程,并为研究前列腺癌中文摘要在自然状态下进展的分子机制提供又一个实用模型。2.在LNCaP前列腺癌进展过程中,始终有AR蛋白表达,且AR总表达水平没有改变,表明AR和AR信号途径的激活可能是LNCaP前列腺癌进展的关键步骤。但在LNCaP前列腺癌进展过程中,AR亚型有差异性表达,由于AR亚型在结构和功能上的差异,这可能会使LNCaP前列腺癌的AR信号激活途径发生改变。3.在本实验的LNCaP前列腺癌进展过程中,PSA分泌水平逐渐升高,且DHT对LNCaP前列腺癌细胞PSA分泌的调节作用逐渐降低,证实血清PSA水平检测是监测前列腺癌进展和复发的可靠指标,并可作为判断各种治疗方法疗效的可靠指标。4.在LNCaP前列腺癌进展过程中,癌细胞抗凋亡特性的获得是一个重要机制,而LNCaP前列腺癌细胞的抗凋亡机制可能与AR和AR信号传导途径的异常激活有关,具体分子作用机制有待于进一步研究。
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