水稻(Oryza sativa L.)CyclinA3:1基因的克隆与功能研究

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细胞分裂是生物的基本特征之一,细胞周期的调控一直是生物学领域中研究的重要内容。虽然对酵母和动物细胞细胞周期机理的认识已取得了较大的进展,但对植物细胞的研究还比较落后。细胞周期蛋白是细胞周期的重要调控因子之一,其中A类细胞周期蛋白调控G1进入S和G2进入M的进程,研究还发现这种蛋白还参与了细胞分裂调控、DNA双链断裂后修复、有丝分裂关卡控制等。其从酵母到人类的各种生物中,且具有高度的保守性。 目前它的作用机制在双子叶植物中研究的较多,但在单子叶植物中的研究尚未见报道。本文对水稻(Oryza sativa L.)(单子叶模式生物之一)的CyclinA3:1进行了研究。 主要结果如下: 1.本研究从籼稻中花11中克隆了水稻Os CyclinA3:1,该位于第三染色体,有8个外显子和7个内含子,其cDNA编码区长度为1122bp的核苷酸,编码373个氨基酸残基。系统遗传学分析表明其同源蛋白在生物进化过程中有高度的序列保守性。 2.分析了Os CyclinA3:1表达特性。用Northern杂交和实时定量PCR技术对其表达模式研究结果显示:Os CyclinA3:1表达的峰值在细胞周期循环中G2/M转化期;Os CyclinA3:1主要在细胞分裂旺盛的组织如根尖茎尖表达,而在成熟组织中信号较弱,其表达并能被GA诱导。 3.为了进一步分析Os CyclinA3: 1的功能,我们构建了Os CyclinA3:1干涉载体、反义表达载体和过量表达载体,用农杆菌介导法转化粳稻品种中花11,其中干涉载体未获得转化植株,反义表达载体和过量表达载体均转化成功。反义表达转化植株的叶表皮细胞数明显减少,但细胞长度增加,部分抵消了叶长的改变,并且抽穗期比对照提前17天左右。过量表达转化植株的叶表皮细胞数明显增多,但细胞长度减小,部分抵消了叶长的改变,并且抽穗期比对照提前了6天左右。结合Hyg扩增和Northern及实时定量PCR结果与上述表型来确定水稻中Os CyclinA3:1的功能。转基因植株显示该基因影响了细胞分裂,并与水稻的生长发育和分化相关。
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