【摘 要】
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趋化素样因子超家族是作者室在国际上首次成功克隆的一个新基因超家族,在人类包括趋化素样因子和趋化素样因子超家簇成员1-8共9个基因,其中,CKLF、CKLFSF1和CKLFSF2的蛋白质
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趋化素样因子超家族是作者室在国际上首次成功克隆的一个新基因超家族,在人类包括趋化素样因子和趋化素样因子超家簇成员1-8共9个基因,其中,CKLF、CKLFSF1和CKLFSF2的蛋白质编码产物具有趋化因子的部分和功能特点,而CKLFSF3-8的编码产物更接近于四次跨膜蛋白.与该家族的绝大多数成员相似,CKLFSF2具有潜在的四次跨膜结构,疏水性强,其完整蛋白难以表达.利用DNAstar软件对CKLFSF2亲水性和抗原性进行了分析,表明权在CKLFSF2两端具有较强的抗原性,我们在原核细胞中表达了GST-CKLFSF2羟基端51个氨基酸的融合蛋白,用Glutathione-Sepharose 4B亲和层析纯化,得到纯度达95％以上的融合蛋白;将其进行凝血酶切割,得到重组人CKLFSF2 C51,N端测序证实为正确片段.利用纯化的GST-CKLFSF2 C51免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,经ELISA法检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性,证实我们得到效价高、特异性好的抗体,可以进一步用于CKLFSF2的表达谱分析和功能研究.综上所述,该课题报告了CKLFSF2的全长cDNA序列、表达谱,原核表达并纯化重组人CKLFSF2 C51,制备了多克隆抗体,进行了组织芯片鉴定,并对其编码蛋白质进行了初步功能研究,证实CKLFSF2具有多种功能,如趋化活性、增强巨噬细胞粘附功能、上调其表面粘附分子CD11b表达、以及促进造血等活性,机制研究表明CCR5是其功能受体之一,这些结果显示,CKLFSF2是一种功能复杂的新细胞因子,与生殖系统、免疫系统和造血系统密切相关,该文工作为今后更为深入的功能和机理研究提供了重要的线索.
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