习惯性流产(habitual abortion，HA)也常常称为复发性流产(rerurrentspontaneous abortion，RSA)指自然流产连续发生3次或3次以上，妊娠不足28W或胎儿体重小于1000g而终止妊娠者，属于不孕症范畴，严重影响广大结婚未育夫妇的身心健康，其病因机制复杂，除了遗传因素、内分泌失调、生殖道解剖异常、感染、环境、心理因素等有明确病因影响外，约40％-60％患者发病原因不明，定义为不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneousabortion，URSA)，近来国内外相关研究提示其多与机体异常的免疫反应因素相关，机体免疫系统的调节主要有体液免疫和细胞免疫之分，且有多种细胞因子参与其中，有研究显示Th1和Th2途径的相关细胞因子，自然杀伤细胞及血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)与人可溶性白细胞抗原-G(human soluble human leucocyte antigen G，sHLA-G)水平等都与不明原因习惯性流产的发生相关，而且有学者尝试在临床上引入免疫治疗被报道对习惯性流产有一定的预防与治疗作用。此外，妊娠成功的关键步骤之一是胚胎能够顺利植入子宫内膜，而这个过程主要与滋养细胞对子宫内膜的适度侵袭相关，滋养细胞在一定程度上具有像肿瘤细胞的侵袭能力，其侵入子宫内膜的过程受到机体自分泌和旁分泌的精确调控，多种细胞因子参与其中，而对细胞外基质的降解作为此过程中的关键一环显得尤为重要，在降解细胞外基质的过程中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）及金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMPs)发挥非常重要的作用，国外学者Anumba等研究发现TIMP-2的异常表达与习惯性流产发生存在一定关系，Konacl等推测MMP-2、9、TIMP-1在子宫内膜低表达可导致习惯性流产发生，国内也有学者报道MMPs及其调控因子广泛参与滋养细胞的侵袭过程，这些都提示了基质金属蛋白酶及其抑制因子可能与习惯性流产相关。有研究报道炎症应激与MMPs的异常表达相关，在妊高症孕妇中炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、TNF-α可导致MMP-9的异常升高，提示炎症细胞因子与MMPs之间存在相关作用的途径，异常的炎症应激反应也可能导致流产的发生;另外，王丹等的研究显示白细胞介素-18（interleukin-18，IL-18）基因位点的突变可能与习惯性流产发生相关，Krieg等的研究显示习惯性流产患者体内IL-8信号途径表达下降，IL-1信号途径上升，提示IL-8异常表达与习惯性流产相关，这些研究从基因层面提示两者之间的关联。综合以上，参与机体免疫调节的细胞因子与MMPs/TIMPs系统可能与习惯性流产的发生相关。　　本课题以细胞因子主要是炎症因子IL-6、TNF-α等及MMPs/TIMPs系统与习惯性流产发生之间的关系为研究点，探讨其在习惯性流产动物模型与临床样本中的表达情况，并深入探讨两者之间的内在联系，期望为临床干预治疗习惯性流产提供新的研究方向。本研究具体结果如下:　　一、炎症因子与MMPs/TIMPs系统指标在习惯性流产模型小鼠及正常对照中的表达　　材料与方法:本研究实验动物采用国际普遍认可的经典自发性流产小鼠动物模型CBA/J×DBA/2，10只(CBA/J×DBA/2)雌鼠为实验组，10只(CBA/J×BALB/C)雌鼠为对照组，10只正常未孕CBA/J雌鼠为空白组，ELISA试剂盒法检测外周血与子宫内膜组织上清中炎症因子白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α及基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2，TIMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）的表达，观察滋养细胞及子宫内膜组织病理改变的情况。　　结果:与空白组比较，实验组和对照组血清和子宫内膜组织上清IL-6、TNF-α、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1显著升高（P＜0.05或0.01）;与对照组比较，实验组血清TNF-α、MMP-2、MMP-9显著升高，IL-6、TIMP-2、TIMP-1显著降低(P＜0.05)，子宫内膜组织上清TNF-α、MMP-9显著升高，MMP-2、IL-6、TIMP-2、TIMP-1显著降低（P＜0.05），三组小鼠滋养细胞对子宫内膜的浸润对照组最深，实验组次之，空白组未见。　　结论:妊娠启动后，细胞因子IL-6、TNF-α、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1都较妊娠前升高，提示这些细胞因子的参与可能是保证妊娠成功进行的重要因素，但细胞因子的过度表达比如本研究中TNF-α、MMP-2、MMP-9的异常升高和IL-6、TIMP-2、TIMP-1的低表达可能与自然流产的发生相关。自然流产小鼠模型存在滋养细胞对子宫内膜浸润程度的不全，这也部分解释了其容易发生自然流产的原因。　　二、炎症氧化应激指标与MMPs/TIMPs系统指标在习惯性流产孕妇和早孕人工流产孕妇中的表达　　材料与方法:本研究于2012年10月至2014年10月在温州医科大学附属第二医院妇产科和台州恩泽医疗中心集团妇产科收集习惯性流产孕妇30例为观察组，收集早孕人工流产孕妇30例为对照组，同期选取20例正常体检者作为血清指标的空白对照组，EILISA试剂盒法检测三组外周血及子宫蜕膜组织上清中的炎症指标IL-6、TNF-α和氧化应激指标超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)，谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-PX)，丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde，MDA)及MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1的表达，观察组和对照组流产后ELISA法检测子宫蜕膜组织上清上述指标的表达;免疫组化SP法检测MMP-9在两组子宫蜕膜中的表达，此外，进一步通过基因测序方法检测分析不明原因的习惯性流产孕妇外周血白细胞介素-8（Interleukin-8，IL-8）的基因多态性。　　结果:与空白组比较，观察组和对照组血清IL-6、TNF-α、MMP-9、MDA、MMP-2、TIMP-2、TIMP-1、SOD、GSH-PX均显著升高（P＜0.05）;与对照组比较，观察组外周血IL-6、TNF-α、MMP-9、MDA显著升高(P＜0.05)，MMP-2、TIMP-2、SOD显著降低（P＜0.05），GSH-PX、TIMP-1两组比较差异无统计学意义;子宫蜕膜中IL-6、TNF-α、MDA显著升高（P＜0.05），MMP-2、MMP-9、TIMP-2、SOD显著降低（P＜0.05），GSH-PX、TIMP-1两组比较差异无统计学意义;免疫组化光密度值测定显示MMP-9在观察组子宫蜕膜的表达低于对照组(P＜0.05);基因多态性分析发现不明原因习惯性流产孕妇在IL-8基因位点rs4073有突变且突变频率较高。　　结论:细胞因子包括炎症氧化应激指标及MMPs/TIMPs系统指标在习惯性流产与早孕人工流产孕妇中存在差异性的表达，外周血IL-6、TNF-α、MMP-9、MDA的高表达及SOD、MMP-2、TIMP-2的低表达，子宫蜕膜IL-6、TNF-α、MDA的高表达及MMP-2、MMP-9、TIMP-2、SOD的低表达可能与习惯性流产的发生相关;基因多态性检测发现IL-8基因位点rs4073在不明原因习惯性流产孕妇中存在高频率的突变，进一步提示炎症因子的异常表达与习惯性流产的发生相关。　　总结论:细胞因子比如炎症因子IL-6、TNF-α和MMPs/TIMPs系统指标MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1的适度表达对保证妊娠正常进行是非常重要的，其参与妊娠过程中母体与胚胎之间免疫调节的正常进行，保证了母体与胎儿之间的“免疫耐受”，但其异常表达则可能与习惯性流产的发生相关，可导致母体胎儿之间的异常免疫攻击，最终引起流产发生，同时细胞因子的基因突变如IL-8rs4073位点的突变也可能参与了不明原因习惯性流产的发生，从基因层面提示特定人群如存在某些细胞因子基因位点突变者可能更容易罹患习惯性流产。