猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的高度接触性传染病,给各国养猪业带来严重损失。并且APP极易产生耐药性,因此疫苗免疫是控制本病的主要措施。目前国内疫苗主要是灭活疫苗,但由于APP血清型比较多,灭活疫苗不能提供对所有血清型的保护力。通过自然途径感染一种血清型的耐过猪能够对所有血清型的攻击产生交叉保护,因此,制作一种有效的弱毒疫苗,通过自然途径感染,就可能使猪体产生对所有APP血清型的保护力。　　 本研究主要是通过化学诱导剂的作用是使APP突变,制作弱毒疫苗。具体内容和结果如下:　　 1 APP的PCR鉴定方法的建立通过参考相关文献,本试验以所有APP血清型分泌的ApxIV的毒素基因结构蛋白apxA为目的基因,设计引物,建立了鉴定APP的PCR方法。通过连接pMD18-T载体测序、比对,得到了鉴定APP的阳性质粒。本研究多次挑选细菌,每次PCR方法的鉴定是一个参考方面,为排除可能杂菌的影响提供保障。　　 2间接血凝方法的建立本试验以提取的APP3荚膜做为抗原,通过致敏绵羊红细胞建立了测定APP3抗体滴度的间接血凝试验方法(IHA)。本研究做猪体试验中需要测定抗体水平,该试验主要为此提供支持。　　 3 APP的化学突变本试验以甲基磺酸乙酯(EMS)为诱导剂,处理APP,并经温度改变得到了APP的弱毒突变株。通过常规培养试验、卫星现象、CAMP试验、生化试验、NAD依赖试验及SDS-PAGE蛋白分析试验,进行分析。没有发现可见的明显区别同原菌株。因此。通过动物试验确定它的变化。　　 4动物实验　　 本试验通过测定突变菌的LD50,了解其毒力变化。结果表明突变菌的毒力有了明显的降低,但小鼠保护力不太高。进行猪体的攻毒保护试验,免疫突变菌株能够提供一定的保护力,但高浓度也会对猪体造成一定程度的损伤。还需要进一步研究其在动物体的反应。　　 5突变菌株的再次突变本试验应用亚硝基胍(NTG)进行二次突变,得到突变菌,通过动物试验初步了解了其毒力变化。