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恩诺沙星（Enrofloxacin,EF）常和替米考星（Tilmicosin,TIM）联合用于治疗肉鸡慢性呼吸道疾病,氟苯尼考（Florfenicol,FF）常和多西环素（Doxycycline,DOX）联合用于鸡大肠杆菌病的防治。但是关于药物联合后产生的代谢性药物相互作用（DDIs）以及这种相互作用对代谢和残留的影响的研究却很少。本研究在前期试验的基础上评估畜禽常用药物联合之后对肉鸡体内外的代谢和残留的作用。本研究建立了符合国际规范的鸡肝微粒体和肉鸡四种可食性组织中同时检测（EF-TIM）及其代谢物（Ciprofloxacin,CIP）和（FF-DOX）及其代谢物氟苯尼考胺（Florfenicolamine,FFA）的2个液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）的方法。在鸡肝微粒体中评价了细胞色素450酶（CYP450）中代谢药物（EF和FF）的关键酶,并且通过探针药物法评价组合里的另一种药物（TIM和DOX）对该药物的关键代谢酶的作用,分别将2组药物体外联用以评价联合使用所产生的药物相互作用对代谢的影响。体内试验则是将2组药物在肉鸡体内联合给药后利用LC-MS/MS来评价对体内代谢及残留的影响。本研究将体外试验和体内试验的结果相结合,进一步揭示了联合用药后所产生的药物相互作用对代谢和残留所产生的影响。研究工作如下:1体外鸡肝微粒体中恩诺沙星联合替米考星对代谢的影响在鸡肝微粒体中,评价EF与CYP450酶的关系以期寻找EF的关键代谢酶,本研究将EF和抑制剂（CYP450酶）共孵育,研究结果用EF代谢的相对活性来表示,即实验组EF的代谢产物CIP的产生量和空白组产生量的比值。结果显示EF的关键代谢酶是CYP3A4和CYP2A6。为了研究EF联合TIM所产生的药物相互作用本实验分别在30、60、90、120 min的时间段内在鸡肝微粒体中进行体外孵育通过探针底物法考察TIM对EF关键代谢酶活性的影响,结果表明了TIM抑制CYP3A4活性,但是其并不影响CYP2A6酶的活性。为了进一步研究EF联合TIM所产生的药物相互作用对代谢的影响,将EF（50μmol/L）和TIM（50μmol/L）2种药物分为单一组和联合组在鸡肝微粒体中进行孵育,孵育的时间为0.5、1、2、4 h。结果表明当EF和TIM在肝微粒体中共孵育4 h时,EF的代谢受到了抑制。2鸡体内恩诺沙星与替米考星联合的残留消除研究本研究建立了EF、CIP和TIM在肉鸡4种可食性组织中的LC-MS/MS的方法,样品经HLB小柱净化前用磷酸盐缓冲液提取,0.1%甲酸水和乙腈（90:10）混合试剂复溶,LC-MS/MS检测。该方法在肉鸡可食性组织中的EF、CIP和TIM的检测限均为5μg/kg且EF、CIP和TIM的定量限均为10μg/kg,在3种不同添加浓度下的EF、CIP和TIM三者的回收率在76.45%到100.03%这个范围内。另外,EF、CIP和TIM三者的批内变异系数小于10.36%,且EF、CIP和TIM三者的批间变异系数小于8.97%。该方法适用于EF、CIP和TIM在肉鸡可食性组织中的定量分析。在体内实验中,恩诺沙星可溶性粉联合替米考星可溶性粉在5 d内饮水给药,LC-MS/MS测定药物分布在肉鸡四大可食性组织的浓度,2种粉剂联合给药后体内EF和TIM的代谢减慢,将实验中得到的数据,采用WT1.4软件分析,以95%的可信限为标准,对EF的残留标示物在不同基质样品中的残留量进行线性回归分析。结果表明恩诺沙星可溶性粉和替米考星可溶性粉在肉鸡中联合使用时,EF在肾脏和肝脏中的休药期为12.05 d和11.32 d,EF在肌肉和脂肪中为11.32 d和10.29 d。建议以饮水给药方式联合使用2种粉剂后,EF在肉鸡的休药期为13 d。TIM在肾脏和肝脏中的休药期为14.90 d和14.09 d,TIM在肌肉和脂肪中为10.33 d和13.62 d。建议2种粉剂以饮水给药方式联合使用时,TIM在肉鸡的休药期为15 d。EF和TIM的休药期在联合使用时由8 d和10 d分别延长为13 d和15 d。3体外鸡肝微粒体中多西环素联合氟苯尼考对代谢的影响在鸡肝微粒体中,评价FF和CYP450酶的关系以期寻找FF的关键代谢酶,本研究将FF和抑制剂（CYP450酶）一起孵育,研究结果用FF代谢的相对活性来表示,即实验组FF的代谢产物FFA的产生量和空白组产生量的比值,结果显示FF主要经CYP3A4和CYP2A6亚型酶代谢。为了研究FF联合DOX所产生的药物相互作用本实验分别在30、60、90、120 min的时间段内在鸡肝微粒体中进行体外孵育通过探针底物法考察DOX对FF关键代谢酶活性的影响,结果发现DOX抑制CYP3A4活性,但是并不影响CYP2A6酶的活性。此外,DOX和FF这2种药物在畜禽养殖过程中经常被联合用药并产生药物相互作用。为了研究DOX和FF之间的相互作用对代谢的影响,用FF（50μmol/L）和DOX（50μmol/L）联合处理鸡肝微粒体,孵育的时间为0.5、1、2、4 h。结果表明FF的代谢在药物相互作用下受到了抑制。4多西环素与氟苯尼考联合在肉鸡体内的残留消除研究本研究建立了DOX、FF和FFA在肉鸡4种可食性组织中的LC-MS/MS的方法,样品中FF经2%氨化乙酸乙酯提取,MCX小柱净化,样品中DOX经Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取,HLB小柱净化,经0.1%甲酸水和乙腈（90:10）混合试剂复溶,LC-MS/MS检测。该方法在肉鸡可食性组织中的DOX、FF和FFA的检测限均为5μg/kg且DOX、FF和FFA的定量限均为10μg/kg,DOX、FF和FFA在3种不同添加浓度下的回收率处于74.93%到90.61%之间,另外,DOX、FF和FFA三者的批内变异系数小于12.78%,且DOX、FF和FFA三者的批间变异系数小于7.85%。该方法适用于DOX、FF和FFA在肉鸡可食性组织中的定量分析。在体内试验中,将盐酸多西环素可溶性粉（10%）与另一种鸡群的养殖中常用粉剂-氟苯尼考可溶性粉（30%）混合使用并且在5 d内饮水给药,LC-MS/MS测定其分布在肉鸡四大可食性组织中的浓度,结果显示肉鸡口服2种药物后FF的代谢会减慢,DOX和FF的休药期都出现了延长的现象,将实验中得到的数据代入软件中计算,采用WT1.4软件,以95%的可信限为标准,对DOX在不同组织样品中残留量进行分析。DOX在肉鸡肌肉和脂肪中的休药期为29.68 d和25.13 d、在肾脏样品和肝脏样品中的休药期为28.94 d和5.80 d,建议2种粉剂联合使用时在DOX肉鸡上的休药期定为30 d。FF和FFA在肉鸡肌肉样品和脂肪样品中的休药期为8.69 d和4.54 d、在肾脏样品和肝脏样品中的休药期为13.21 d和8.22 d,建议2种粉剂联合使用时在肉鸡上FF的休药期定为14 d。DOX和FF联合时的休药期由28 d和5 d延长为30 d和14 d。