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Jaspine B是从sponge Pachastrissa sp.和Jaspis sp.中分离出来的,具有显著的抗癌活性,经过对Jaspine B进行修饰,与1,2,3-三唑类化合物结合,合成出新的化合物1,2,3-triazole-jaspine B hybrids,在后续实验中被命名为CY6。本研究旨在确定是否CY6靶向激活RIP3,有效抑制胃癌细胞的增殖,并探讨其抗癌作用的机制。其中,MTT法用来检测细胞活性,蛋白免疫印迹用来检测CY6诱导的蛋白表达变化,免疫共沉淀检测CY6引起的复合体的形成或解离,自噬流通过标记LC3的免疫荧光检测,另外我们利用慢病毒包装的方式引入RIP3表达下调细胞株。主要研究结果如下:1.在体外研究中发现CY6可以有效抑制胃癌细胞MGC803,HGC27和SGC7901的增殖,其中对MGC803细胞生长抑制作用最为显著,而对人正常胃上皮细胞GES1无明显毒性,证明该化合物具有选择性细胞毒作用。2.我们用Hoechst33342/PI荧光双染色来检测不同浓度CY6作用于MGC803细胞24 h后细胞的形态变化,发现在CY6处理的MGC803细胞中Hoechst33342荧光减弱,而PI荧光增强。检测程序性坏死蛋白RIP3和RIP1,发现CY6上调RIP3和RIP1的表达,并且CY6诱导RIP3-RIP1复合体的形成。说明CY6诱导胃癌细胞程序性坏死。3.用倒置显微镜观察不同浓度CY6作用于胃癌细胞MGC803和SGC7901细胞24 h后,分析MGC803和SGC7901细胞死亡的形态学变化,我们在CY6处理的细胞中发现细胞表面出现空泡化现象,且细胞空泡化现象随CY6作用的浓度增高而明显增多。Beclin-1、LC3和ATGs是自噬途径的几个关键蛋白,Bcl-2和Bcl-xl能够通过结合Beclin-1从而抑制自噬。我们发现在胃癌细胞中,CY6上调Beclin-1和LC3的表达,并且在MGC803细胞中检测到Beclin-1-Bcl-2/Bcl-xl复合物的解离。另外,自噬抑制剂Baf-A1能够部分逆转CY6诱导的胃癌细胞死亡。以上结果说明CY6可以诱导胃癌细胞自噬。4.P62是自噬溶酶体蛋白,参与自噬的降解过程,我们发现CY6上调P62的表达,推测CY6诱导的自噬在后期受到阻滞,无法顺利降解。LC3免疫荧光法检测CY6（4μM）作用于胃癌细胞MGC803不同时间段后,用共聚焦显微镜观察自噬流的变化情况,发现CY6处理的MGC803细胞出现LC3聚集,并且随着CY6作用时间的延长,LC3聚集的数量越来越多。证明CY6诱导胃癌细胞发生缺陷型自噬。5.在检测CY6处理胃癌细胞的RIP3蛋白表达结果中,我们发现经CY6处理的胃癌细胞中RIP3的分子量发生明显的迁移现象,说明CY6磷酸化RIP3。另外有研究表明,P62能够结合RIP蛋白。免疫共沉淀的结果证明CY6诱导MGC803细胞中形成了RIP3-P62复合体。6.本文中我们引入了RIP3表达下调的MGC803细胞株,分别用CY6（4μM）作用于野生型MGC803细胞和RIP3-/-型MGC803细胞,结果发现降低RIP3的表达完全阻断CY6诱导的细胞死亡,逆转CY6引起的自噬蛋白表达变化。结果说明,RIP3是CY6诱导细胞死亡的主要靶点。7.在裸鼠体内构建胃癌MGC803移植瘤,结果发现CY6在体内抑制肿瘤的生长。另外,通过提取组织蛋白检测发现CY6在体内上调RIP3、P62和Beclin-1的表达,促进Beclin-1-Bcl-2/Bcl-xl复合体的解离以及P62-RIP3复合体的形成。结果说明,CY6在体内抑制肿瘤增殖,并诱导自噬和程序性坏死。在胃癌细胞中,化合物CY6可作为程序性坏死因子RIP3的激活剂,持续增加自噬体的数量并上调自噬蛋白P62,诱导胃癌细胞缺陷型自噬,最终促进RIP3与自噬蛋白P62的结合,诱导胃癌细胞程序性坏死。