论文部分内容阅读
柑橘采后真菌病害造成的损失巨大,生物防治被认为是最具有潜力替代化学杀菌剂的采后病害防治手段之一。本课题组在研究生防菌柠檬形克勒克酵母(Kloeckera apiculata,34-9)抗菌机理的过程中,发现该菌株能够产生抗菌活性物质苯乙醇(2-Phenylethanol, PEA).本研究主要从三个方面展开:检测苯乙醇对多种采后真菌病害的抗菌效果;以柑橘意大利青霉菌(Penicillium italicum, B3)为病原菌,研究苯乙醇的抗菌机理;研究苯乙醇作为群集感应分子(QSMs)促进生防酵母34-9更好发挥抗菌效果的作用机理。主要结果如下:1、PEA的抗菌效果:离体条件下,PEA对意大利青霉菌B3的最小抑菌浓度MIC为0.2%,最小杀菌浓度MFC为0.8%。柑橘活体接种试验揭示PEA能够有效地控制柑橘采后青霉病的发生。离体条件检测PEA的抑菌范围,发现PEA对柑橘绿霉病、柑橘炭疽病、柑橘酸腐病、柑橘黑腐病、苹果青霉病、苹果灰霉病、芒果炭疽病、芒果蒂腐病、番茄早疫病、番茄根霉腐烂病、葡萄灰霉病、葡萄根霉腐烂病均具有良好的防治效果。2、PEA对病原菌的作用机理:显微镜观察发现,离体条件下PEA能够明显抑制病原菌孢子的萌发、芽管的伸长、延缓菌丝的生长,但对菌丝形态作用不明显;利用扫描电镜观察病原菌侵染柑橘果实的过程,发现添加PEA,能够有效地抑制病原菌孢子萌发、菌丝伸长,阻碍病原菌对果实伤口的侵染;通过电导率测定及荧光染色发现,PEA处理病原菌时几乎不改变其细胞膜的渗透性。而利用透射电镜观察PEA处理后病原菌的亚细胞结构,结果显示PEA能够作用于线粒体使其结构发生显著变化。3、PEA对拮抗酵母34-9的作用:在培养基中添加PEA能够促进34-9在生长过程中形成假菌丝;扫描电镜结果表明,用含有PEA的34-9菌液涂抹柑橘保鲜,酵母细胞能够更快地在果实表面形成生物膜;Real time RT-PCR结果显示,0.2%浓度PEA处理34-9后,絮凝基因34-93691的转录表达水平显著上升。由此可见,PEA可以作为QSMs调控生防酵母34-9的絮凝基因表达,使酵母细胞在果实表面形成生物膜,更好地发挥生物防治作用。