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目的:本研究通过在胃癌组织和细胞系中检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体含pyrin结构域蛋白6(NOD-like receptor family pyrin domain containing 6,NLRP6)的表达情况,研究过表达/敲低NLRP6对胃癌细胞增值能力的影响,探讨NLRP6表达水平与胃癌患者预后的关系及意义。方法:1.通过实时荧光定量PCR、Western-blot、免疫组化技术检测胃癌组织与正常胃粘膜组织中NLRP6在mRNA水平和蛋白水平的表达情况。2.通过实时荧光定量PCR、Western-blot检测不同的胃癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞中NLRP6的表达情况。3.通过构建含有目的基因的质粒载体,将慢病毒感染NLRP6低表达细胞系培养得到稳转细胞株。然后通过细胞功能学试验,如MTT实验、裸鼠肿瘤转移实验等,依次检测过表达NLRP6对胃癌细胞生物学功能的影响。4.通过siRNA构建敲低NLRP6基因的细胞系模型,检测NLRP6敲低后对胃癌细胞生物学功能的影响。5.通过组织芯片的免疫组化分析NLRP6基因的表达水平与患者的临床病理的关系以及与患者的五年生存率的关系。结果:1.实时荧光定量PCR检测结果显示,所选32例胃癌组织中NLRP6的mRNA的相对表达水平低于正常胃黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05);通过Western-blot检测8例胃癌组织,结果显示胃癌组织中NLRP6蛋白的相对表达量同样低于正常的胃黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.实时荧光定量PCR、Western-blot检测胃癌细胞系(SGC7901、MKN45、AGS、MGC803)和正常胃黏膜上皮细胞系(GES-1)中NLRP6的mRNA的相对表达水平和蛋白的相对表达水平,结果显示4株胃癌细胞系的NLRP6相对表达水平低于正常胃黏膜上皮细胞株(P<0.05),3.成功构建稳定表达NLRP6的胃癌细胞稳转株MKN45-NLRP6和AGS-NLRP6,MTT实验结果显示MKN45-NLRP6组和AGS-NLRP6组与相应的对照组比较,细胞增殖速率明显下降(P<0.05)。平板克隆实验结果同样显示了MKN45-NLRP6组和AGS-NLRP6组与相应的对照组比较,细胞增殖速率明显下降(P<0.001)。裸鼠肿瘤转移实验结果显示:MKN45-NLRP6组形成的瘤体的重量和体积数量明显少于对照组MKN45-Ctrl(P<0.05)。4.AGS细胞系经si RNA敲低NLRP6后,MTT实验和平板克隆实验结果显示其增殖能力(P<0.05)有不同程度的提高。5.72例来自组织芯片的胃癌与NLRP6相关病例的胃癌病例,其分析结果显示患者性别、肿瘤浸润深、远处转移与NLRP6表达量无关(P>0.05),与年龄(P<0.05)、淋巴结转(P<0.05)移、临床分期有关(P<0.05)。生存曲线表明高表达NLRP6能够提高胃癌患者生存率(P<0.05)。结论:1.胃癌组织与正常胃黏膜上皮组织中NLRP6的表达水平不同,NLRP6在正常胃粘膜上皮组织中的表达高于胃癌组织,提示NLRP6在胃癌的的形成过程中起着抑癌基因的功能。2.NLRP6能够在体内外影响胃癌细胞的增殖。3.NLRP6表达水平高低与患者的年龄、淋巴结转移和临床分期有关并影响预后生存率。