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黄瓜花叶病毒(CucumberMosaicVirus，CMV)能侵染包括茄科、十字花科、豆科等重要经济作物在内的1000多种单子叶和双子叶植物，是寄主最多、分布最广、对农作物危害最为严重的植物病毒之一，并且其基因组结构简单，因此CMV是研究RNA病毒在寄主上致病机制的模式病毒之一。卫星RNA(SatelliteRNA，satRNA)是一类依赖于辅助病毒(Helpervirus)进行复制、包被和在寄主内扩散的低分子量的RNA，是寄生于病毒的亚病毒，影响辅助病毒在寄主植物上的症状表达。本文对黄瓜花叶病毒两种卫星RNA(T1sat和2msat)进行了克隆和序列分析，并在此基础上分析卫星T1sat对不同辅助病毒的症状调控，确定卫星2msat5’端的不同碱基对其在烟草上积累量的影响，研究2mF5sat在烟草上低含量积累的分子机制。
黄瓜花叶病毒卫星克隆及序列分析以CMV侵染的番茄总RNA为模板，通过RT-PCR方法获得了一卫星RNA，对其进行克隆、测序结果显示：该卫星大小为337碱基(命名为T1sat)，序列登陆号DQ785472。T1sat与国内外其他地区报道的43个卫星RNA序列进行多态性分析表明：CMV卫星RNA的同源性与地区分布相关，与寄主来源等没有明确的相关性。参照T1sat的克隆方法，在本研究中，还获得了一大小为335nt的CMV-satRNA(2msat)，序列登陆号EU022373。
T1sat对不同寄主的症状调控将克隆的番茄株系T1sat与CMV-Fny假重组于烟草、番茄和西葫芦中，分析该卫星的存在对辅助病毒症状的调控情况，并采用RealtimeRT-PCR技术分析该卫星RNA对CMV-Fny各个基因组积累量的影响。结果表明：T1sat能延缓或减轻CMV-Fny在烟草上的症状反应；添加卫星T1sat后，CMV-Fny在番茄上症状加重：CMV-Fny和CMV-Fny+T1sat在西葫芦上均引起花叶皱缩症状，T1sat对西葫芦中CMV-Fny的症状没有影响。T1sat与CMV假重组后对不同寄主体内CMV各基因组RNA的定量结果分析发现：T1sat均抑制辅助病毒在烟草和番茄基因组的积累量，且在番茄寄主中病毒基因组含量受到抑制效应更明显；而西葫芦中，CMV-Fny基因组的积累量不受T1sat影响。因此，CMV-Fny在寄主上的不同症状可能与病毒基因组含量不相关。
2msat的5’端突变体对其在烟草上积累量的影响大多数CMV-satRNA5’端起始序列为“5’-GUUUUGUUU﹍﹍-3’”，本研究中克隆的卫星2msat5’端序列为“5’-GUUGUUU﹍﹍-3’”，通过PCR.技术对其5’端序列(5’-GUUGUUUG﹍﹍-3’)进行碱基添加/缺失构建一系列2msat的5’端突变体，并将2msat及其突变体分别与CMV-Fny假重组接种于烟草。在不同的接种时间用RT-PCR和Real-timeRT-PCR分析5’端改变对其在寄主中积累量的影响。结果表明：在2msat5’端(5’-GUUGUUUG-3’)中缺失或添加第1个G后面的1～2个U，不影响以CMV-Fny为辅助病毒的2msat在烟草中的复制，而在其分子5’端缺失4个碱基(GUUG)后则不能进行复制，因此2msat5’端的GUUU结构是起始其复制的前提。同时在烟草系统叶中，除2mF4sat以外，各个卫星RNA的含量在接种后期呈下降趋势，这可能是由于2msat的5’端改变影响其长距离运输，从而干扰寄主中卫星RNA的积累量。
第288位C碱基决定2mF5sat在烟草中的低含量积累2msat突变体在烟草中相对含量分析的结果表明2mF4sat与T1sat在烟草系统叶中含量均较高，而2mF5sat的含量很低。而T1sat与2mF5sat只在第288位点具有一个碱基的差异：2mF5(C288)和T1sat(U288)。本研究通过对该位点定点突变，获得该位点的4个突变体2mF5(G288)、2mF5(A288)、2mF5(C288)以及T1sat(U288)。结果表明：卫星T1sat(U288)、2mF5(A288)和2mF5(G288)均能在烟草系统叶中高含量积累，而2mF5(C288)含量远远低于前3者的含量，因此2mF5sat第288化的C碱基决定了该satRNA在烟草中的低含量积累。等量病毒粒子中的RNA分析结果表明，CMV-Fny+T1sat和CMV-Fny+2mF5接种叶中这病毒粒子的satRNA的含量无明显的差别，而在系统叶中T1sat的含量远远高于2mF5sat，因此以CMV-Fny为辅助病毒，2mF5sat在烟草系统叶中的低含量积累与其包被效率没有关系。不同的接种时间2mF5sat相对含量分析结果显示，在接种叶中2个satRNA的积累量相差不明显，而系统叶中，T1sat的含量却远远高于2mF5sat；在所测定的4个时间点内，2mF5sat的长距离运输效率均远远低于T1sat。因此2mF5sat在烟草低含量积累可能由于其的长距离运输效率低而引起的。